沉香化气丸收载于《中国药典》(2015年版)中,全方由沉香、木香、广藿香、醋香附、陈皮、砂仁、醋莪术、六神曲(炒)、炒麦芽、甘草十味药构成。有理气疏肝,消积和胃之功效,常用于治疗胃溃疡、消化性不良、脘腹胀痛等疾病。目前,对于沉香化气丸复方的研究仅局限于基本的药材鉴别、药效研究和少量成分的含量测定,难以说明沉香化气丸的整体药效和“多成分、多靶点、多途径”整合治疗作用的特点,无法科学反映其内在质量。因此本课题将利用UPLC-Q-TOF/MS技术对沉香化气丸的化学成分进行定性分析及口服给药后药物在体内代谢的研究,着眼于分析沉香化气丸体内和体外化学成分的变化,为进一步阐明沉香化气丸的药效物质基础具有重要意义。同时建立中药指纹图谱技术与多种指标成分含量测定的分析方法,对中药复方的整体性质量进行控制,为沉香化气丸的质量控制提供科学依据。本论文的实验研究从以下四个方面进行:一、基于UPLC-Q-TOF/MS快速鉴别沉香化气丸中化学成分的研究采用UPLC-Q-TOF/MS技术对中药复方沉香化气丸中的化学成分进行定性分析。实验采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7μm),流动相为乙睛-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min-1;采用电喷雾源(ESI)正、负离子模式下分别采集数据。根据化合物准确的相对分子质量、二级碎片离子信息、相关参考文献数据及对照品对照,从沉香化气丸中分离和鉴定出73个化学成分,包括36个黄酮类、16个2-(2-苯乙基)色酮类、7个三萜皂苷类、2个倍半萜内酯及12个其他类成分。本实验表明UPLC-Q-TOF/MS联用技术为鉴别沉香化气丸中化学成分提供简便、快速、准确的方法,该研究为进一步分析沉香化气丸的药效物质基础及质量控制提供了研究基础。二、沉香化气丸UPLC指纹图谱与化学模式识别研究建立沉香化气丸的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,为评价该制剂的整体质量提供参考依据。采用Phenomenex Kinetex C18(4.6 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min-1;柱温35℃;分段变波长测定:0~3 min,285 nm;3~20 min,210 nm;20~24 min,254 nm;24~42 min,210 nm。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”对20批沉香化气丸样品计算相似度。建立了20批沉香化气丸指纹图谱,标定了27个共有峰,通过对照品指认了12个共有峰,20批样品相似度均大于0.98,共有峰保留时间的RSD<0.5%,峰面积的RSD比较大,表明各批次的样品化学成分较为相似,但其成分的含量存在一定差异。通过聚类分析可将样品聚为3类,并结合主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析法,发现芸香柚皮苷、橙皮苷、甘草苷、木香烃内酯等7个成分是造成不同批次样品差异性的主要标记物。指纹图谱的构建与化学模式识别为沉香化气丸的质量控制提供更全面的参考。三、UPLC波长切换法同时测定沉香化气丸中7种成分的含量建立UPLC波长切换法同时测定沉香化气丸中甘草苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸、木香烃内酯和广藿香酮的含量测定方法。采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 m L·min-1,波长切换(0~20 min,210 nm,检测甘草苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷;20~25 min,254 nm,检测甘草酸;25~30.8 min,210 nm,检测木香烃内酯;30.8~34 min,310 nm,检测广藿香酮),柱温35℃。7种有效成分与相邻峰达到基线分离,7种成分的峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9994~1.0000);平均加样回收率(n=6)范围为98.7%~101.7%,RSD均小于2.88%;方法重复性(n=6)的RSD均小于2.93%;供试品溶液在室温条件下24 h内稳定,RSD均小于1.81%。该方法快速、准确度高、灵敏度高,专属性强,为沉香化气丸的质量标准研究提供参考。四、沉香化气丸在大鼠体内的入血成分及代谢产物研究采用UPLC-Q-TOF/MS技术检测沉香化气丸后大鼠血浆及尿样中的入血成分及代谢产物。实验采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱,流动相为乙睛-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min-1;采用电喷雾源(ESI)下采集数据。对空白大鼠与给药大鼠血浆和尿样的总离子流图,进行提取目标离子分析。结果发现,在血浆及尿液中共检测到24个成分,其中包括5个原型成分和19个代谢产物。主要代谢途径包括水化反应、葡萄糖醛酸化、去甲基化、水解反应、羟基化、硫酸化。本实验建立的方法快速、简单、灵敏,该方法可用于快速鉴定沉香化气丸在大鼠体内的入血成分及代谢产物,为阐明沉香化气丸的药效物质基础提供科学依据,同时为更好地了解沉香化气丸的体内吸收代谢机制研究提供参考。