大针茅干旱胁迫下qRT-PCR内参基因的筛选及PIP2s基因的表达分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:wgxwjl
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大针茅(Stipa grandis P. Smirn)是亚洲中部特有的典型草原种,对大针茅的实生苗经干旱胁迫处理后,进行了如下研究:根据已公布的内参基因序列设计引物,利用qRT-PCR方法,从肌动蛋白基因(Act2)、微管蛋白a基因(TUB-a),微管蛋白b基因(TUB-b),18S核糖体RNA基因(18SrRNA)、甘油醛-3磷酸脱氢酶基因(GAPDH、真核延伸因子基因(EF-la)、RNA聚合酶II基因(RNA POL Ⅱ)、腺嘌呤磷酸核糖转化酶基因(APRT)、翻译因子基因(TLF)9个候选基因中,利用△Ct值分析法及geNorm、NormFinder软件分析法综合比较各个候选基因的稳定值,筛选出在干旱胁迫下大针茅根部表达最稳定的内参基因是18S rRNA,其次是EF-la和TLF,最不稳定的内参基因为RNA POL Ⅱ其中最稳定的内参基因组合为18SrRNA和EF-la。在叶片中表达稳定的内参基因顺序依次为18SrRNA、TLF和EF-la,最不稳定的内参基因是TUB-b;其中最稳定的内参基因组合为18S rRNA和TLFo根据已经克隆的大针茅PIP2;1和PIP2;2基因保守区序列设计简并引物,利用qRT-PCR方法对大针茅水孔蛋白基因PIP2;1和PIP2;2的表达进行研究,结果表明:在干旱胁迫下大针茅的PIP2;1和PIP2;2基因在根部的表达量均远远高于叶片的表达量,并且随着干旱胁迫强度的增加这两个基因的表达量都不同程度的上调,其中PIP2;1基因在干旱胁迫20d时表达量达到最高,约为对照的2.2倍,之后又有所下降;而PIP2;2在干旱胁迫15d时就已经达到了最大表达量,约为对照的2.5倍,之后表达量开始下降。说明PIP2;1和PIP2;2基因参与了大针茅的水分运输生理过程。
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