电针足三里调控脾气虚大鼠小肠粘膜相关转运体的机制研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fsdgvii
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目的:本研究拟建立脾气虚大鼠的模型,电针“足三里”穴进行治疗,观察脾气虚模型大鼠的小肠粘膜上皮组织内的相关转运体蛋白SGLT1,GLUT2和PepT1基因及蛋白水平的表达,比较实验前、实验后各项指标在体内表达的变化,探讨电针足三里穴对小肠吸收糖类和蛋白质等营养物质功能的影响,进而从分子生物学的层面,部分阐述“脾主运化”的现代科学含义。材料与方法:实验于2017年5月至2018年5月在辽宁中医药大学科研平台实验室及动物实验中心进行。40只雄性SD大鼠,随机分为:正常组、脾气虚组、足三里组和非经非穴组,每组各10只。所有的大鼠均在SPF级动物实验中心饲养。除正常组外,其余3组大鼠均采用劳倦过度、不规则饮食的复合方法,建立脾气虚证大鼠的模型。造模成功以后,分别对足三里组及非经非穴组大鼠的“足三里”穴、非经非穴点施以电针刺激,连续7天。整个过程中监测大鼠的体重;测量各组大鼠的胸腺指数和脾脏指数;测量各组大鼠的小肠推进率;采用HE染色方法观察各组大鼠的小肠粘膜组织形态学层面的变化;采用RT-qPCR法分别检测各组大鼠小肠粘膜上皮组织的葡萄糖转运体SGLT1,GLUT2和小肽转运体PepT1的mRNA表达水平,采用△△CT法对RT-qPCR结果进行定量分析;采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组大鼠小肠粘膜上皮组织的葡萄糖转运体SGLT1,GLUT2和小肽转运体PepT1的蛋白水平。结果:1.电针脾气虚大鼠双侧足三里后,脾脏指数、胸腺指数、小肠推进率水平均升高。2.电针脾气虚大鼠双侧足三里后,小肠粘膜组织形态学的变化HE染色示:脾气虚组的大鼠小肠粘膜组织可见部分损伤,足三里组小肠粘膜组织可见一定程度的恢复。3.电针脾气虚大鼠双侧足三里后,小肠粘膜上葡萄糖转运体蛋白及基因表达水平的变化与正常组相比,脾气虚组大鼠小肠粘膜组织内葡萄糖转运体SGLT1和GLUT2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与脾气虚组相比,足三里组大鼠的小肠粘膜组织内SGLT1和GLUT2蛋白表达水平有所升高(P<0.05),非经非穴组无显著性差异(P>0.05)。与正常组相比,脾气虚组大鼠的小肠粘膜组织内葡萄糖转运体SGLT1和GLUT2基因的表达水平明显降低(P<0.05);与脾气虚组相比,足三里组大鼠的小肠粘膜组织内SGLT1和GLUT2基因的表达水平呈升高趋势(P<0.05),非经非穴组无显著性差异(P>0.05)。4.电针脾气虚大鼠双侧足三里后,小肠粘膜上小肽转运体蛋白及基因表达水平的变化与正常组相比,脾气虚组的大鼠小肠粘膜组织内小肽转运体PepT1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与脾气虚组相比,足三里组大鼠的小肠粘膜组织内PepT1蛋白表达水平有所升高(P<0.05),非经非穴组无显著性差异(P>0.05)。与正常组相比,脾气虚组大鼠的小肠粘膜组织内小肽转运体PepT1的基因表达水平明显降低(P<0.05);与脾气虚组相比,足三里组的大鼠小肠粘膜组织内PepT1基因表达水平有所升高(P<0.05),非经非穴组无显著性差异(P>0.05)。结论:1.电针“足三里”穴可以修复脾气虚大鼠的小肠粘膜损伤,提高胃肠动力。2.电针“足三里”穴可以通过调节脾气虚大鼠小肠粘膜上皮的SGLT1,GLUT2和PepT1的异常表达,调节小肠对糖类和蛋白质代谢产物的吸收功能,从而发挥健脾益气的作用。3.非经非穴组大鼠经电针干预后,未能改善脾气虚的状态,进一步验证了“足三里”穴疗效的特异性。
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