卵巢发育与母猪的繁殖年限密切相关,适当的饲粮能量水平调控卵泡健康发育是保证母猪适时发情、受胎、并提高产仔数的基础。原始卵泡作为卵巢发育的起点,在胎儿期已形成。为弄清胎儿期具有时间依赖性的功能蛋白对卵巢发育的作用及母体能量水平对胎猪卵巢发育的影响,本研究比较了梅山猪和约克夏猪胎儿卵巢发育以及其对母体饲粮能量水平敏感性的差异,并在此基础上进一步研究了母体能量水平对后代(生前、生后)卵巢健康发育的影响,本研究包括以下三部分：试验一梅山和约克夏胎猪卵巢发育的差异研究本试验旨在比较梅山猪和约克夏猪胎儿卵巢发育过程中调控原始卵泡形成和转化为次级卵泡时的关键蛋白表达。试验分别选取日龄、体重相近的纯种梅山(72.58±0.73kg)和约克夏(135.73±0.54kg)初产母猪各8头,分别用同一头纯种梅山和约克夏公猪精液人工授精,配种后分别参照中国猪饲养标准(2004)和NRC(2012)配制梅山和约克夏母猪妊娠期饲粮。妊娠0-30天,每头母猪每天饲喂2kg；31-90天,每天饲喂2.4kg。妊娠第55天每个品种随机选择4头母猪深度麻醉后屠宰,剩余母猪于妊娠第90天屠宰,收集雌性胎猪卵巢,利用双向荧光差异凝胶电泳结合质谱分析的方法考察两个品种卵巢蛋白表达差异。结果显不：1.电泳结果：1)妊娠第55天,两个品种胎儿卵巢有1551个差异蛋白点,约克夏较梅山胎猪卵巢共计14个蛋白上调,13个蛋白下调(约克夏/梅山>1.6,梅山/约克夏>1.6,P<0.05蛋白点27个)。2)妊娠第90天,两个品种胎儿卵巢中存在1400个差异蛋白点,约克夏较梅山胎猪卵巢共计7个蛋白上调,9个蛋白下调(约克夏/梅山>1.6,梅山/约克夏>1.6,P<0.05蛋白点16个)。2.质谱分析结果：1)妊娠第55天,约克夏胎猪卵巢表达上调蛋白主要参与原始卵泡组装,如肌动蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白；梅山胎猪卵巢表达上调蛋白为原始卵泡形成前的相关蛋白,如丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶2调节亚基1β、丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶2调节亚基1α等。2)妊娠第90天,约克夏胎猪卵巢表达上调的蛋白主要参与应激反应,如热休克蛋白；梅山胎猪卵巢表达上调蛋白为调节原始卵泡向初级卵泡转化相关的蛋白,如甲胎蛋白、转铁蛋白等。以上结果表明：梅山和约克夏胎猪卵巢发育过程中,梅山猪卵巢原始卵泡形成时间较晚,但是梅山胎猪于原始卵泡向初级卵泡转化阶段卵巢发育潜能优于约克夏猪。试验二母体能量水平对不同品种胎猪卵巢发育的影响本试验旨在考察母体能量水平对约克夏猪和梅山猪胎儿卵巢发育的影响。试验选取日龄、体重相近的纯种约克夏(135.54±0.66kg)和梅山(72.84±0.66kg)初产母猪各16头,分别用同一头纯种约克夏和梅山公猪精液人工授精,配种后约克夏母猪分别饲喂能量水平为3.4Mcal/kg、3.0Mcal/kg饲粮；梅山母猪饲喂能量水平为3.OMcal/kg、2.6Mcal/kg饲粮,饲喂量及饲喂方式同试验一。妊娠第55,90天时,每组随机选择4头母猪深度麻醉后屠宰,收集雌性胎猪卵巢,首先通过蛋白组学技术,测定约克夏3.OMcal/kg组以及梅山2.6Mcal/kg组卵巢样品,进而分析同一品种不同时间点卵巢发育差异蛋白,明确不同时间点特征性蛋白表达规律,并进一步考察能量水平对特征蛋白mRNA表达的影响。结果显示：1.蛋白组学分析结果：1)约克夏猪妊娠第55天与妊娠第90天相比胎儿卵巢有1551个差异蛋白点,其中25个蛋白上调,18个蛋白下调(55d/90d>1.6,90d/55d>1.6,P<0.05的蛋白点43个)；质谱分析结果显示妊娠55天约克夏胎猪卵巢上调的蛋白主要有甲胎蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白等,妊娠90天高表达的主要为凝溶胶蛋白、78葡萄糖调节蛋白等。2)梅山猪妊娠第55天与妊娠第90天相比胎儿卵巢有1740个差异蛋白点,其中15个蛋白上调,12个蛋白下调(55d/90d>1.6,90d/55d>1.6,P<0.05的蛋白点27个)；质谱分析结果显示妊娠55天梅山胎猪卵巢显著上调的蛋白主要包括甲胎蛋白、肽脯氨酰顺反异构酶等；妊娠90天胎猪显著上调的蛋白主要为抗胰蛋白酶、凝溶胶蛋白等。2.基因表达结果：1)与低能量水平组相比,约克夏猪妊娠期母体饲喂高能量水平饲粮,显著降低了妊娠55天胎儿卵巢中调控原始卵泡形成的关键蛋白抗胰蛋白酶、甲胎蛋白mRNA的表达量(P<0.05),同时也降低了妊娠90天胎儿卵巢中调控细胞抗应激能力的关键蛋白78葡萄糖调节蛋白以及调控原始卵泡向初级卵泡转化的重要蛋白凝溶胶蛋白mRNA的表达量(P<0.05)。2)妊娠55天,母体饲喂不同能量水平饲粮对梅山胎猪卵巢原始卵泡形成的关键蛋白如抗胰蛋白酶、甲胎蛋白等的表达量无显著影响,而且妊娠90天母体饲喂不同能量水平饲粮对梅山胎猪卵巢中调控原始卵泡向初级卵泡转化的凝溶胶蛋白以及参与机体炎症反应的关键蛋白肽脯氨酰顺反异构酶的表达量也无显著影响。本试验结果表明：母体高能量水平通过影响调控原始卵泡形成、原始卵泡向初级卵泡转化以及细胞抗应激能力等基因的表达,不利于约克夏胎猪卵巢发育；母体摄入不同能量水平饲粮不影响梅山猪胎儿卵巢发育。试验三母体妊娠期饲粮能量水平对后代卵巢健康的影响本试验旨在考察母体能量水平对约克夏猪后代卵巢发育过程中氧化应激、卵泡发育的影响。24头约克夏妊娠母猪高、低能量水平饲喂,前期处理(妊娠0-90天)与试验二相同,妊娠第90天屠宰后,各处理组余下4头母猪饲喂至分娩,每天饲喂3kg。泌乳期均采食相同饲粮,仔猪断奶后每窝选择6头雌性仔猪,按猪场后备母猪常规饲养管理方式饲养。母猪妊娠第55天、90天每组随机选择4头母猪屠宰并分别收集胎儿卵巢,子代母猪160天和初情时,每窝均选择平均体重的1头母猪屠宰并分别收集子代母猪卵巢样品,测定相关指标。结果显示：1.母体妊娠期高能量水平降低子代160天时大卵泡数目、肝脏重量以及初情阶段小卵泡数目(P<0.05)。2.与妊娠期低能量水平组相比,母体高能量水平提高了妊娠90天胎猪卵巢丙二醛含量(P<0.05),降低了总超氧化物歧化酶(P<0.01)、CuZn-超氧化物歧化酶(P<0.05)、谷胱甘肽还原酶(P=0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶(P<0.05)以及总抗氧化能力(P<0.05)的酶活；妊娠期母体高能量水平降低子代后备母猪160天阶段时卵巢中总超氧化物歧化酶活力(P<0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶(P<0.05)以及总抗氧化能力(P<0.05)。3.母体妊娠期高能量水平导致妊娠90天胎猪卵巢中B细胞淋巴瘤因子2 (B-cell lymphoma-2, BCL2)等促凋亡相关因子mRNA相对表达量高于低能组(P<0.05),程序性死亡调节因子(Bcl-2 Assaciated X protein, BAX)等凋亡抑制因子低于低能组(P<0.05)。后备母猪160天时BAX的mRNA相对表达量低能组高于高能组(P<0.05),同时,BCL2的mRNA相对表达量在160天和初情时低能组均低于高能组(P<0.05)。本试验结果表明：妊娠期母体摄入高能量水平饲粮加剧了子代卵巢氧化应激和细胞凋亡,降低卵泡数目,不利于后代卵巢健康。综上所述,梅山胎猪原始卵泡形成时间晚于约克夏猪,但是梅山胎猪卵巢发育潜能优于约克夏猪,有利于原始卵泡向初级卵泡转化。母体妊娠期高能量水平对梅山胎猪卵巢发育无影响；母体妊娠期高能量水平加剧了约克夏胎猪和生后卵巢氧化应激水平和细胞凋亡,不利于其胎儿卵巢发育并影响后代卵巢健康。由此表明梅山猪和约克夏猪卵巢发育对饲粮能量具有不同的敏感性。