论文部分内容阅读
【目的】肿瘤的生长和转移与血管生成密切相关，血管生成被认为是肿瘤生长和浸润转移的形态学基础。血管内皮细胞是肿瘤血管最重要的组成部分，内皮细胞的激活在血管生成机制的启动发挥关键作用。近年来，研究报道，肿瘤对放射线的敏感性主要取决于肿瘤血管内皮细胞而非肿瘤细胞。通过研究与肿瘤血管内皮细胞放射敏感相关基因，有助于增强肿瘤对放射治疗的敏感性及个体化治疗方案的制定。本研究利用基因芯片技术检测子宫内膜癌中血管内皮细胞与放射敏感相关基因表达谱，通过数据分析筛选与子宫内膜癌血管内皮细胞放射敏感相关基因，为子宫内膜癌放射增敏及抗血管生成治疗提供新的靶点。【方法】无菌条件下取出新鲜子宫内膜癌标本，针芯研磨制成单细胞悬液。将制备好的单细胞悬液与磁珠结合提取血管内皮细胞并进行原代培养。6MV400cGyX线对原代血管内皮细胞进行照射，并观察细胞照射前后形态学变化变化。使用北京博奥生物有限公司的人类全基因组表达谱芯片检测6Gy X线照射前后子宫内膜癌血管内皮原代细胞的基因表达谱，筛选照射前后的差异表达基因。通过分析X线照射前后细胞株的基因变化以获得由X射线引起的差异表达基因。随机挑选4个2倍以上的差异基因，使用相对实时定量荧光PCR验证芯片的基因改变，以确定芯片检测结果的是否可靠。【结果】提取的原代人子宫内膜癌血管内皮细胞通过免疫荧光技术证实表达内皮细胞特异性标志物vWF及CD31。通过基因表达谱共筛选出共同的有意义差异表达基因68条，其中共同上调/下调的基因41条，上调23条，下调为18条，涉及细胞凋亡，细胞信号传导，细胞粘附，细胞应激，血管生成，DNA损伤与修复和细胞周期调节等多种细胞调节机制。MMP9、THBS1、ECGF1与CXCL12基因通过实时定量荧光PCR验证证实了芯片检测结果的可靠性。【结论】通过应用基因芯片技术分析了由放射诱导的子宫内膜癌微血管内皮的基因变化，并进一步对有意义的差异表达基因进行探讨，为子宫内膜癌放射治疗与抗血管生成靶向治疗提供新的靶点。通过在体外研究子宫内膜癌血管内皮细胞的放射敏感性可以为临床个体化放射治疗方案提供指导。