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第一部分:乳腺癌细胞Ki67表达与其增殖、侵袭能力相关性的研究目的:研究细胞增殖抗原Ki67在不同乳腺癌细胞株中的表达,探讨其与乳腺癌细胞恶性表型的关系。方法:采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测3株乳腺癌细胞中Ki67mRNA和蛋白表达水平。MTT检测乳腺癌细胞株的增值能力。Transwell检测乳腺癌细胞株的迁移及侵袭能力。结果: 3株乳腺癌细胞Ki67转录和翻译水平呈同步变化(P<0.05),均为MDA-MB-435s最高,MDA-MB-231稍低,MCF-7最低。增殖、侵袭能力亦为MDA-MB-435s最强,MDA-MB-231次之,MCF-7最弱。结论: 3株乳腺癌细胞Ki67mRNA和蛋白水平与细胞增殖、侵袭能力呈正相关,提示Ki67在乳腺癌发生演进中可能作为独立因素起重要作用,有望成为治疗的新靶点。第二部分:Ki67反义核酸对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的抑制及相关机制的研究目的构建增殖核相关抗原(Ki67)反义核酸载体,并研究阻断Ki67基因的表达对MDA-MB-435s细胞生物学行为的抑制效应。方法用基因重组方法将人Ki67基因cDNA保守序列反向克隆到真核表达质粒pEGFP-C1中,构建人反义Ki67核酸载体。然后通过脂转法瞬时转染MDA-MB-435s细胞系,用RT-PCR和Western blot检测转染前后Ki67mRNA和蛋白的表达;MTT、Boyden分别检测增殖及侵袭能力变化;流式细胞仪检测凋亡率改变。结果转染Ki67反义核酸载体组的MDA-MB-435s细胞Ki67mRNA和蛋白表达明显低于对照组,分别下调48%、72%;且细胞增殖受抑制,体外侵袭能力也明显降低;流式结果凋亡率达26.16±0.06%;与对照组相比差异均有显著性意义(P<0.05)。结论阻断Ki67的表达可显著抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-435s的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡。提示Ki67可以作为乳腺癌治疗的新靶点。第三部分:乳腺癌细胞增殖活性与淋巴结转移的关系目的:探讨细胞增殖抗原标记物Ki67在乳腺导管癌中的表达及与淋巴结转移等临床指标的相关性。方法:采用免疫组化方法,检测60例乳腺导管癌及邻近正常组织中Ki67表达,并将表达结果与淋巴结转移情况及临床病理特征进行统计学分析。结果: 60例乳腺导管癌中有51例Ki67表达(85%),而癌旁及正常乳腺组织散在性弱表达或无表达。Ki67在淋巴结转移组表达评分中位数为3.9,而在非淋巴结转移组评分中位数为2.0,差异有显著性(P<0.05)。淋巴结转移至Level I、II、III者,Ki67表达皆较无转移组明显增高(P<0.01)。结论:增殖抗原标记物Ki67表达与乳腺癌的淋巴结转移与否及转移距离有关。