论文部分内容阅读
目的:探讨大蒜素是否具有抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡的作用,并从分子水平研究大蒜素对HeLa细胞生长调控机制。方法:将HeLa细胞分别与不同浓度大蒜素(2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml)共同培养24h、48h、72h后,以WST-1法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率;再以不同浓度大蒜素(2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml)干预HeLa细胞24h及以相同浓度大蒜素(10ug/ml)干预HeLa细胞24h、48h和72h,以流式细胞仪检测各组HeLa细胞凋亡率并测定细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期所占比例。以20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml大蒜素干预HeLa细胞24h后,提取各组细胞总RNA和总蛋白,进行定量RT-PCR扩增,分析大蒜素对β-catenin,c-myc及cyclinDl mRNA表达的影响;Western-blot法分析大蒜素对HeLa细胞β-catenin蛋白表达的影响。以上实验均重复3次,实验数据用x±s表示,采用SPSS17.0软件统计分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:WST-1法发现,2.5-160ug/ml浓度范围内的大蒜素作用HeLa细胞24-72h后,细胞增殖抑制率由24%上升至82%,大蒜素对HeLa细胞增殖的抑制作用与大蒜素浓度及作用时间呈正相关关系,差异有统计学意义(P<0.05)。提示大蒜素可抑制HeLa细胞增殖,其抑制作用有浓度及时间依赖性。流式细胞仪检测细胞凋亡率发现,2.5-160ug/ml大蒜素作用HeLa细胞24h后,细胞凋亡率随大蒜素浓度增高而升高,由(8.54±1.53)%上升至(63.06±5.32)%;10ug/ml大蒜素作用HeLa细胞24h、48h及72h后,细胞凋亡率由(9.37±1.39)%上升至(61.84±3.74)%,差异有统计学意义(P<0.05)。提示大蒜素能促进HeLa细胞凋亡,并且有浓度及时间依赖性。以2.5-160ug/ml大蒜素与HeLa细胞共同培养24h后发现,低于10ug/ml浓度大蒜素对HeLa细胞周期阻滞作用不明显;当大蒜素浓度≥10ug/ml时,处于G0/G1期的细胞由(38.2±1.62)%增多至(66.6±3.25)%,处于S期细胞由(43.1±1.02)%减少至(24.8±1.19)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。以10ug/ml大蒜素作用HeLa细胞24-72h后,G0/G1期细胞由(30.10±1.62)%增多至(47.2±4.24)%,处于S期细胞数由(53.1±1.02)%减少至(35.2±2.35)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示大蒜素以浓度时间依赖方式将HeLa细胞阻滞在G1/S期,减少DNA的复制,从而抑制细胞分裂与增殖,大蒜素对HeLa细胞G2/M期阻滞作用不明显。不同浓度大蒜素(20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml)作用HeLa细胞24h后,半定量RT-PCR发现各实验组β-catenin,c-myc及cyclinDl mRNA表达随大蒜素浓度增高而逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05);Western-blot法检测实验组核蛋白β-catenin表达水平明显低于阴性对照组,与浓度负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示大蒜素能在转录水平下调Wnt信号通路的上游信号因子c-myc及cyclinD1的表达,下调关键蛋白β-catenin在胞质的表达,从而抑制HeLa细胞增殖,促进其凋亡。结论:大蒜素通过抑制β-catenin的表达而抑制Wnt信号通路的激活,下调c-myc、cyclinD1等的表达,阻止Rb-E2F通路的活化,阻滞细胞周期在G1/S期,抑制HeLa细胞的增殖,促进凋亡。