藤椒叶药用有效成分的提取及其抑菌性能研究

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藤椒树叶具有与藤椒果皮相似的特殊麻香气味,是藤椒产业的副产物。在藤椒种植管理中剪裁的藤椒枝叶,通常作为废物被焚烧或掩埋,没有合理利用,造成资源浪费,甚至污染环境。本文以藤椒树叶为原料研制开发绿色天然生物抗菌剂,以期废物利用,改善环境,提高藤椒农产品的附加值,为藤椒叶在医药、健康、天然食品防腐剂等方面应用的可行性提供实验数据和理论依据。论文通过试验研究了藤椒树叶中挥发油的提取方法,利用光谱技术、气相色谱-质谱联用技术等分析了挥发油的主要成分,利用滤纸片琼脂扩散法、试管二倍稀释法等方法研究了挥发油的抑菌特性。主要的研究结论如下:(1)采用超声-微波辅助提取法有利于从藤椒树叶中提取挥发油;采用不同的提取溶剂,挥发油提取率不同。水提取藤椒叶挥发油最佳提取工艺为:料液比为1:12 g/ml、藤椒叶粒径为4 mm、超声辅助时间40 min、微波辅助提取功率为600 W、微波辅助提取温度90°C、微波辅助提取时间50 min。最佳条件下提取三次,挥发油平均提取率为2.65%。乙醇提取藤椒叶挥发油最佳提取工艺为:料液比为1:12 g/ml、藤椒叶粒径为4mm、超声时间40 min、微波辅助提取功率为600 W、微波辅助提取温度50°C、微波辅助提取时间50 min。乙醚溶液提取藤椒叶挥发油最佳提取工艺为:料液比为1:12g/ml、藤椒叶粒径为4 mm、超声辅助时间40 min、微波辅助提取功率为600 W、微波辅助提取温度30°C、微波辅助提取时间50 min。(2)藤椒叶挥发油的主要成分为芳樟醇、D-柠檬烯、α-葑烯和隐品酮等;采用不同的提取溶剂,挥发油的化学组成存在差异。水、乙醇和乙醚三种溶剂提取的挥发油中分别检测到物质的种类为53、28和30;其中三种溶剂提取的挥发油中,具有抗菌作用的芳樟醇相对含量分别为10.31%、20.19%、20.31%,水和乙醇提取挥发油中抑菌物质D-柠檬烯为18.17%、1.75%,乙醚提取物未检出。(3)藤椒叶挥发油能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的生长,且抑制效果与其中芳樟醇、D-柠檬烯等萜烯类物质的相对含量有关,水提取的挥发油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果优于乙醚和乙醇。水提藤椒叶挥发油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径均为17?0.5 mm;对金黄色葡萄球菌的MIC值为3.75%,MBC值为7.5%;对大肠杆菌的MIC值为7.5%,MBC值为15%。乙醇提取藤椒叶挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为15?0.5mm、12?0.5 mm;对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC和MBC值均为15%。乙醚提取藤椒叶挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径均为12?0.5mm;对金黄色葡萄球菌的MIC值为7.5%,MBC值为15%;对大肠杆菌的MIC和MBC值均为7.5%。介质温度和酸碱性会影响挥发油的抑菌稳定性,碱性条件能增强挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,酸性条件对挥发油抑菌活性影响不明显,在介质pH3.0和pH11.0时,介质自身就能抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长。热处理和紫外照射对水和乙醇提取的挥发油的抑菌活性影响不明显,乙醚提取挥发油在60-70°C下抑菌性减弱。通过观察细胞形态变化,藤椒叶挥发油能破坏大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细胞壁和细胞膜。
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