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第一部分不同抑菌浓度苦参碱对大肠埃希菌体外生物膜形成的抑制作用目的本实验采用LB肉汤—腹膜透析管系统在体外建立大肠埃希菌生物膜模型,探讨不同抑菌浓度的苦参碱对大肠埃希菌在体外生物膜形成能力的影响。方法用二倍稀释法分别测量苦参碱和左氧氟沙星对大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)。将高压蒸汽灭菌过的腹膜透析管载体置入无菌的24孔板中,分为6组,空白对照组(阴性对照组)、1/2MIC左氧氟沙星组(阳性对照组)、1/2 MIC苦参碱组、1/4MIC苦参碱组、1/8MIC苦参碱组、1/16MIC苦参碱组。从开始建立大肠埃希菌生物膜模型时,就将药物干预组加入药物调成相应的药物浓度。于第1天、3天、7天分别采用连续稀释法对生物膜内活菌进行计数、结晶紫半定量、银染法、电镜观察生物膜的形成情况。结果苦参碱MIC为4096 μg/ml,左氧氟沙星MIC 0.015625 μg/ml。发现无论第1、3、7天,活菌计数及结晶紫半定量中1/2MIC苦参碱组与空白组相较可以抑制大肠埃希菌生物膜的形成(P<0.05),与1/2MIC左氧氟沙星相比无统计学差异(P>0.05),经快速银染观察,1/2MIC苦参碱及1/2MIC左氧氟沙星组载体表面形成较分散,团块状黑色棉絮状结构较空白组少,其他浓度的苦参碱则与空白组相差不大,但经扫描电镜观察,其他抑菌浓度苦参碱虽未对生物膜形成产生多大影响,但却影响了生物膜的形态,经药物作用后,扫描电镜下生物膜结构较为松散,菌体周围黏液样物质较少。结论1/2MIC苦参碱组及1/2MIC左氧氟沙星组在体外对大肠埃希菌的生物膜形成有抑制作用,而1/4 MIC、1/8 MIC、1/16 MIC苦参碱组对大肠埃希菌生物膜无抑制作用,但在扫描电镜的下观察发现1/4 MIC、1/8 MIC、1/16 MIC苦参碱组生物膜的形态产生影响。第二部分不同抑菌浓度苦参碱对大肠埃希菌外膜蛋白AmRNA表达量的影响目的探讨在不同抑菌浓度苦参碱作用下,在生物膜早、中、晚期对大肠埃希菌外膜蛋白A(ompA)mRNA表达量的影响。方法将高压蒸汽灭菌过的腹膜透析管载体置入无菌的24孔板中,分为6组,空白对照组(阴性对照组)、1/2MIC左氧氟沙星组(阳性对照组)、1/2 MIC苦参碱组、1/4MIC苦参碱组、1/8MIC苦参碱组、1/16MIC苦参碱组。从开始建立大肠埃希菌生物膜模型时,就将药物干预组加入药物调成相应的药物浓度于第第1、3、7天提取24孔板中总细菌RNA,根据TAKARA试剂盒要求逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR下观察不同时间、不同药物浓度下大肠埃希菌外膜蛋白A(ompA)mRNA表达量。结果在药物不用抑菌浓度的干预下,1/2MIC左氧氟沙星组、1/2 MIC苦参碱组、1/4MIC苦参碱组、1/8MIC苦参碱组、1/16MIC及1/2 MIC左氧氟沙星组与空白组相比无论在第1、3、7天均能抑制大肠埃希菌ompA的mRNA表达(P<0.05),且在不同时期、不同浓度苦参碱对其ompAmRNA表达量影响无统计学差异(P>0.05)。结论1/2 MIC苦参碱组、1/4MIC苦参碱组、1/8MIC苦参碱组、1/16MIC苦参碱组及1/2 MIC左氧氟沙星组在生物膜形成早、中、晚期均能抑制其ompAmRNA的表达。