姜黄素对2型糖尿病模型大鼠及3T3-L1前脂肪细胞PTP1B通路的影响研究

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目的:糖尿病(DM)是一种严重危害人类健康的慢性、代谢性疾病,已成为当今中国乃至世界公共卫生的重大问题之一,糖尿病的研究已经越来越受重视。立足肝脾肾,三脏同治辨证论治糖尿病是最能够切合糖尿病病机的中医治疗方法,临床和实验研究均证实其安全有效。郁金是治疗糖尿病调肝治法的常用中药,既往的研究证实其发挥作用的主要物质是其所含的姜黄素。本课题旨在通过观察姜黄素对2型糖尿病模型大鼠、3T3L-1脂肪细胞的降糖、改善胰岛素抵抗的疗效,以及对PTP1B通路各因子的影响,以期明确姜黄素降糖及改善胰岛素抵抗的作用靶点,探讨调肝治法在2型糖尿病治疗中的作用机制,为临床治疗运用调肝法治疗2型糖尿病提供实验依据。方法:一、将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化后,应用XTT法观察姜黄素对其分化及增值的影响,用生化法观察姜黄素对葡萄糖摄取量的影响,用real-time PCR法检测姜黄素对脂肪细胞PPARγ、C/EBPαmRNA、SREBP-1表达、内脏脂肪内脂素、抵抗素及脂联素mRNA表达的影响。二、将sd大鼠应用高脂饮食联合小剂量stz造模成功后,按体重、血糖分层随机分为3组,分别为姜黄素、吡格列酮、模型组,8周后处死动物,观察如下指标:(1)糖代谢基本生化指标:体重、葡萄糖耐量、胰岛素耐量、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR,ISI指数、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血清FFA、TNF-α及肝肾功变化;(2)用real-time PCR法和western-blot法检测大鼠肝脏组织PTP1B、 IRS-2、IRS-1mRNA表达及PTP1B、IRS-2蛋白表达;(3)用real-time PCR法和western-blot法大鼠肌肉组织PTP1B、IRS-1、GLUT4mRNA及PTP1B、GLUT4蛋白表达。结果:一、姜黄素能够显著降低高脂饲料联合小剂量STZ诱导的2型糖尿病大鼠血糖、血脂水平、体重;显著降低2型糖尿病大鼠FFA、TNF-a,从而增加2型糖尿病大鼠对胰岛素的敏感性,改善糖尿病大鼠的胰岛素抵抗。姜黄素可以明显降低2型糖尿病大鼠的肝重及肝脏指数,缓解其脂肪肝,降低大鼠肝脏PTP1B、IRS-1mRNA的表达及蛋白表达,增强IRS-2mRNA表达。姜黄素可以明显降低2型糖尿病大鼠肌肉组织的PTP1B、IRS-1mRNA的表达及PTP1B的蛋白表达,增强GLUT4mRNA表达。二、姜黄素能够增加脂肪细胞葡萄糖摄取和利用、促进脂肪细胞分化关键因子PPARγ和C/EBP a mRNA的表达其效应与PPARγ激动剂吡格列酮相似。同时,姜黄素可能通过抑制内脂素,抵抗素mRNA的表达,增强脂联素mRNA的表达而低浓度时促进脂肪细胞增殖,高浓度时则抑制其增殖、同时促进前脂肪细胞的分化。结论:一、体内实验:姜黄素能够通过作用于PTP1B通路而起到降糖及改善胰岛素抵抗的作用。二、体外实验:姜黄素能够促进脂肪细胞分化抑制脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞葡萄糖摄取和利用而改善脂肪细胞的胰岛素抵抗。本实验以姜黄素作为调肝法治疗2型糖尿病研究靶点,初步证实了姜黄素是通过作用于PTP1B通路而起到了改善糖脂代谢的作用,为调肝法治疗2型糖尿病提供了实验依据。
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