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自从RNA干扰现象被发现以来,RNA干扰技术因其沉默基因具有高效性、高稳定性、高度特异性等优点被广泛应用于基因功能研究、基因治疗和药物筛选等领域。MUC5AC是一种分泌型黏蛋白,正常表达于胃肠道、呼吸道和生殖道,对其起到润滑和保护的作用。MUC5AC在多种肿瘤中均有异常表达,可能在肿瘤的发生发展起到一定得作用。据报道MUC5AC可以作为诊断胆管癌的一种肿瘤标志物,但对胆管癌的发生发展是否起到了一定得作用还不清楚。本实验利用RNA干扰技术,针对MUC5AC基因的不同靶序列,构建了三个表达小发夹RNA得表达质粒,分别观察其在HCCC-9810中对MUC5AC基因的沉默作用,并研究抑制MUC5AC基因后对此肿瘤细胞生长及凋亡的影响,由此可以研究MUC5AC在MUC5AC相关肿瘤发生发展中的作用,并探讨其在MUC5AC相关肿瘤的基因治疗方面潜在的应用价值。目的探讨MUC5AC特异性siRNA对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响。方法设计合成三对特异性siRNA,构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siRNA的表达质粒,pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3,应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒(空质粒对照)转染HCCC-9810,同时此载体可独立表达DsRed荧光蛋白,转染后8至12小时在荧光显微镜下可通过直接观察荧光蛋白的表达来计算质粒的转染效率,而不影响siRNA沉默的效果,RT-PCR检测MUC5AC基因mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测MUC5AC粘蛋白的表达;MTT检测细胞生长增殖情况;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果基因测序表明成功构建质粒;转染后荧光蛋白表达率28.57%;RT-PCR结果表明在mRNA水平,三个质粒都可抑制MUC5AC基因的表达,并可使MUC5AC的表达下降,MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用,流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加。结论构建pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3质粒明显抑制了MUC5AC基因在mRNA水平及蛋白的表达,并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡,为探讨MUC5AC在MUC5AC相关肿瘤的基因治疗方面奠定了一定的理论基础。