目的：甘松为败酱科(Valerianaceae)甘松属Nardostachys DC.植物甘松Nardostachys chinensis Bet.、匙叶甘松Nardostachys jatamansi (D. Don) DC.的干燥根及根茎,具有理气止痛,开郁醒脾,安神等功效,药用历史非常悠久,为藏医、中医常用药。其主要成分是萜类,具有镇静、抗癫痫、抗抑郁、促神经生长、改善认知能力、保护心肌细胞、降血压、抑菌与抗疟、抗肿瘤等多种药理活性。除药用外,甘松在食品和化妆品领域也有非常广阔的开发前景。随着其在药品、食品和化妆品等领域的应用和发展,必然需要-个更加完善的质量标准以保证质量。而国家药典对甘松质量标准规定现状仅规定挥发油含量不低于1.8%,指标单一,缺乏对确切指标成分,不能准确反映其质量。针对甘松在各个领域的研究应用和发展趋势,本课题对甘松资源、化学成分及质量标准的建立进行研究,调查甘松在主要产区分布、种类、收购情况,建立能全面反映甘松药材特征HPLC指纹图谱分析方法,HPLC法测定主要活性成分含量,为甘松质量评价体系的建立提供科学依据,为深层次的药效、药理学机制、制剂工艺研究提供物质支持。方法：通过大量查阅国内外关于甘松属植物的文献,进行综述；采用文献查阅和实地调查相结合的方法对甘松药材原植物的资源情况进行调查；采用现代色谱分离手段对甘松的成分进行分离、纯化；采用波谱和质谱法对化合物的结构进行鉴定；采用水蒸气蒸馏提取甘松地上部位、地下部位和匙叶甘松的挥发油；通过GC-MS分析所提取挥发油的化学成分及相对含量进行测定；采用正交设计法对甘松中甘松新酮放入取工艺进行优化；利用石蜡切片结合显微镜对甘松和匙叶甘松的药材粉末、根、根茎、茎、叶组织构造进行观察；利用TLC色谱建立简单、准确的甘松鉴别方法；利用高效液相色谱建立甘松的HPLC指纹图谱并对有效成分进行含量测定。结果：第一部分：文献综述对甘松药材进行本草考证,并综述了近年来针对甘松的鉴别手段、化学成分、药理作用及临床应用方面的研究进展。第二部分：甘松药用资源调查调查结果显示调查地区多数有甘松分布,匙叶甘松资源分布较少。甘松主要分布在甘肃省南部地区的临夏回族自治州和甘南藏族自治州,青海省东南地区的果洛藏族自治州,四川省西北部的阿坝藏族自治州和甘孜藏族自治州。匙叶甘松主要分布在青海省西南部玉树藏族自治州的称多县,在四川省甘孜县、石渠县、理塘县也有分布。第三部分：甘松化学成分研究共分离得到7个化合物,采用现代波谱和光谱技术对其中4个进行了鉴定,分别为蔗糖、甘松新酮、齐墩果酸、β-谷甾醇。甘松地上部分挥发油中鉴定出40个化合物,占总挥发油的77.32%；地下部位挥发油鉴定出36个,占总挥发油的88.02%；匙叶甘松挥发油中鉴定出22个化合物,占总挥发油的79.79%；共有主要成分为水菖蒲烯、β-马里烯、α-古芸烯、马兜铃烯。第四部分：甘松新酮不同提取方法研究最佳提取方法为渗漉法,最佳提取条件为：甘松药材冷冻粉碎,过40目筛,相当于药材10倍重量的95%乙醇超声提取2次,每次提取24h。第五部分：甘松药材质量标准研究1甘松药材原植物、药材性状鉴别观察匙叶甘松和甘松原植物,其植物形态基本一致,在以下几方面存在区别：匙叶甘松根茎密被叶鞘纤维,花后花序主轴和侧轴常不明显伸长,果实被毛；甘松的根茎被片状老叶鞘,花后花序主轴和侧轴多数明显伸长,果实光秃.观察甘松药材性状,甘松和匙叶甘松基本一致,主要鉴别点为：匙叶甘松根茎密被纤维状的叶鞘；甘松的根茎被片状老叶鞘。2粉末以及根、根茎、茎、叶横切面显微鉴别利用显微镜观察甘松药材粉末以及根、根茎、茎、叶横切面的特征,结果显示甘松和匙叶甘松粉末特征基本一致,与药典描述相比石细胞较少见；甘松和匙叶甘松的根、茎、叶横切面主要构造基本一致,叶略有区别：匙叶甘松叶片上表皮细胞下的上皮细胞纵向伸长呈长方形或长条形,薄壁细胞充满紫色内含物,甘松叶片中上皮细胞则为横向的圆形或不规则性状,薄壁细胞中紫色内含物较少。2薄层鉴别采用薄层色谱法,以甘松新酮为指标,吸取样品溶液和甘松新酮对照品溶液点在硅胶薄层板上,石油醚-乙酸乙酯-乙酸(10：3：0.1)为展开剂展开,1%硫酸显色,254nm下观察到17个产地的甘松具有共同的特征斑点。3 HPLC指纹图谱利用高效液相色谱建立甘松的HPLC指纹图谱,最终确定的色谱条件：色谱柱为MGⅡC18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱(资生堂公司),流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为288nm,柱温为30℃,进样量为25μL。在此色谱条件下,精密度、稳定性和重复性试验中各共有指纹峰相对峰面积比值的RSD值均<3%,稳定性试验结果显示供试品溶液在24h内基本稳定。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行数据处理,对17个不同产地的甘松样品指纹图谱进行分析,获得了20个共有指纹峰,基本特征一致。该结果表明所建立的甘松药材的HPLC指纹图谱方法可靠、稳定,为其质量控制提供了依据；同时对不同生长期、不同部位、不同品种的甘松药材进行了指纹图谱测定,结果显示指纹图谱基本一致,化学成分组成无明显差别,但是个别成分的含量存在差异。4甘松新酮的含量测定采用HPLC色谱法,以甘松新酮为对照品,对照品回归方程为Y=28248X-79.975r=0.9992,在0.1225-1.470 mL·min-1范围内与各自的峰面积线性关系良好,平均加样回收率为98.84%,RSD为1.99%。17个不同产地样品进行甘松新酮含量测定,平均含量为0.821%其中四川省阿坝地区上阿坝所产甘松中甘松新酮含量最高,为1.970%；四川甘孜自治州理塘县西城门所产匙叶甘松中含量最低,为0.505%；四川阿坝地区和青海久治所产的样品中甘松新酮含量均高于0.8%。5蒙花苷的含量测定采用HPLC色谱法,以蒙花苷为对照品,对照品回归方程分别为Y=1383.1x+28.243r=0.9992,在0.022-0.22 mL·min-1范围内与峰面积线性关系良好。该方法精密度,稳定性,重现性良好,平均加样回收率合格,17个不同产地样品进行甘松新酮含量测定,测得四川理塘农民新村所产的匙叶甘松中蒙花苷含量最高为0.0381%,四川甘孜地区阿色沟所产的甘松中含量最低为0.0033%,平均含量为0.821%。论文创新点：(1)首次比较了甘松地上部位和地下部位挥发油的化学成分,以及甘松和匙叶甘松挥发油的化学成分。(2)首次对甘松中甘松新酮提取工艺进行研究,通过正交试验确定确甘松新酮的最佳提取工艺。(3)首次建立了利用HPLC测定甘松有效成分甘松新酮含量的方法。