三氧化二砷与放射线联合对食管癌细胞株-Eca109的增敏机制

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangjie198811
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目的:探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide, As2O3)及As2O3与放射线联合对食管癌Eca109细胞株的生长抑制作用;分析两者联合对Eca109细胞周期和凋亡的影响。为As2O3的临床应用提供理论依据。方法:(1)As2O3对Eca109细胞增殖的抑制作用:采用MTT法检测不同浓度As2O3(0.05μmol/L、0.10μmol/L、0.15μmol/L、0.20μmol/L、0.25μmol/L、0.30μmol/L、0.35μmol/L、0.40μmol/L、0.45μmol/L、0.50μmol/L),在不同时间段(12 h、24 h、48 h、72h)对Eca109细胞增殖的抑制率;(2)放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用:采用MTT法检测不同剂量的放射线(0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy),在不同时间段(12h、24h、48h、72h)对Eca109细胞增殖的抑制率;(3)As2O3联合放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用:采用MTT法检测两种浓度的As2O3(0.20μmol/L、0.25μmol/L)联合(2Gy、4Gy)的放射线在不同的时间段(12h、24h、48h、72h)对Eca109细胞增殖的抑制率;(4)As2O3联合放射线对Eca109细胞周期及凋亡的影响:采用流式细胞技术检测0.20μmol/L的As2O3联合2Gy的放射线在不同时间(48h、72h)点对Eca109细胞周期及凋亡的影响;(5)采用免疫印迹技术检测0.20μmol/L的As2O3联合2Gy的放射线处理48h后,Eca109细胞中细胞色素(ccyt-c)和锰超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase, MnSOD)的表达变化情况。结果:(1)As2O3在0.05~0.50μmol/L浓度范围内均能一定程度的抑制Eca109细胞的增殖,且随着浓度增加和作用时间延长,对细胞增殖的抑制作用增强。浓度在0.05~0.20μmol/L时,抑制率低,当浓度大于0.25μmol/L后,抑制率迅速升高。0.20~0.25μmol/L是抑制率由低到高的缓冲区。(2)放射线在0.5~8Gy范围内均对Eca109细胞增殖有一定程度的抑制作用。其中在0.5~2Gy之间,抑制率低,当剂量大于4Gy后,抑制作用明显增强。2~4Gy是抑制率由低到高的缓冲区。(3)0.20μmol/L、0.25μmol/L浓度的As2O3分别联合2Gy、4Gy的放射线在各时间段(12h、24h、48h、72h)对Eca109细胞的抑制率较单纯药物组和单纯照射组均高,并且抑制率大于单药组和照射组的抑制率之和。随着时间的延长,各个联合组抑制率随之升高。其中0.25μmol/L+4Gy联合组在72h的细胞抑制率最大,为83.56%,与其它联合组在对应时间段相比较,有显著性差异(P=0.000~0.001)。而0.25μmol/L+2Gy与0.20μmol/L+4Gy两组相比,在各对应时间段其抑制率无明显差异(P=0.057~0.298)。(4)流式细胞技术检测结果显示:0.20μmol/L+2Gy联合组在72h的凋亡率最高,为12.26%,与单药组和单纯照射组比较,有显著性差异(P=0.008~0.046)。联合组在72h细胞周期改变也最为明显,细胞被阻滞于G2/M期,该期所占比例为27.5%,与非联合组比较有显著性差异(P=0.000)。(5)Western blotting分析结果显示,cyt-c在各组未发生明显变化(P=0.27~0.86),而MnSOD在各处理组中均有所降低,且0.20μmol/L+2Gy联合组降低最为明显,两两比较均有显著性差异(P=0.000~0.028)。结论:(1)As2O3能抑制食管癌Eca109细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系。(2)As2O3能提高放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用,有增敏作用。(3)As2O3可通过影响Eca109细胞周期,诱导细胞凋亡,来增强放射线对细胞的杀伤作用。(4)放射线可降低Eca109细胞中MnSOD蛋白的表达,与As2O3联合可使这一作用明显增强,二者单独或联合均对cyt-c的表达无影响。
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