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背景肺癌是我国第一高发的恶性肿瘤,局部复发和远处转移一直是影响肺癌预后的主要原因。寻找一种多效抑制肿瘤增殖和转移、副作用较小的药物是进一步提高肺癌预后的关键因素。大量的研究表明,姜黄素是一种多效作用药物,具有抗氧化、抑菌抗炎及抗癌活性。前期研究发现,姜黄素具有抑制肺癌生长作用,且与TOLL通路和EGFR通路密切相关,但是机制至今未阐明,值得我们深入研究。目的1.探讨姜黄素对NSCLC增殖、侵袭迁移的影响;2..探讨姜黄素抑制NSCLC增殖和转移的机制;3明确姜黄素干预TLR4/MyD88通路的作用机制;4.分析TLR4、MyD88在NSCLC组织中的表达特性及临床关联。方法1.体外功能实验探讨姜黄素对非小细胞肺癌增殖与转移的影响(1)MTS实验、平板克隆检测姜黄素对NSCLC细胞增殖影响;(2)流式细胞术检测姜黄素对NSCLC细胞周期的影响;(3)Transwell小室迁移实验检测姜黄素对NSCLC细胞迁移能力的影响。2.姜黄素影响肺癌细胞生物学功能的具体机制(1)Western blotting检测细胞周期相关蛋白及相关转录因子的变化,明确姜黄素调控细胞增殖的分子机制;(2)Western blotting检测EMT相关蛋白的变化,明确姜黄素调控NSCLC细胞转移的分子机制。3.姜黄素对TLR4/MyD88和EGFR通路调控Western blotting检测姜黄素处理NSCLC细胞后,TLR4/MyD88与EGFR的表达改变;随后添加EGF刺激,不同时间点检测TLR4/MyD88与EGFR的表达改变。4.TLR4/MyD88在NSCLC患者中高表达及与患者预后的关系免疫组化检测TLR4、MyD88在非小细胞肺癌和肺良性病变组织中的表达,分析其表达水平与临床参数、预后的关系;分析TLR4与MyD88的相关性。结果1.姜黄素抑制NSCLC细胞的体外增殖、克隆形成和侵袭转移。2.姜黄素处理后细胞周期蛋白CyclingA1、A2、B1、细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK1表达下调,提示细胞周期阻滞于G2-M期。同时,E-cadherin表达上调,Vimentin、TCF8、Snail、Slug表达下调,提示EMT过程被逆转。此外,与细胞周期和EMT调控相关的转录因子AP-1家族蛋白如c-Jun、c-Jun ser63、JunB、JunB ser259、c-fos、及c-fos ser32的表达均降低。提示姜黄素通过下调AP-1家族蛋白的表达诱导NSCLC发生G2-M期阻滞和EMT逆转。3.姜黄素抑制TLR4、MyD88与EGFR的表达,EGF刺激后可以逆转姜黄素对TLR4信号通路的抑制作用。4.TLR4和MyD88在NSCLC组织中的阳性表达率显著高于良性组织(p<0.001);TLR4高表达是NSCLC患者不良的预后因素。MyD88的表达与TLR4的表达成正相关。结论姜黄素可以通过调控TLR4/MyD88通路与EGFR通路之间的相互作用来抑制AP-1的表达,进而调控细胞周期蛋白和EMT相关蛋白的表达,从而抑制非小细胞肺癌细胞增殖与转移;TLR4/MyD88在非小细胞肺癌组织中高表达,并与NSCLC患者预后显著相关。