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【目的】微小RNA(mi RNA)是约21-25个核苷酸组成的非编码小RNA,作用是能够作为基因表达的转录后调节剂。已经发现这些小分子调节参与不同细胞生理过程:如调控细胞的增殖,发育,分化,凋亡等。宫颈癌是恶性实体瘤,其是女性恶性肿瘤中高发病率、死亡率的主要原因之一。高危人乳头状瘤病毒(hr HPV)持续感染与子宫颈癌密切相关,自噬被认为可抑制病毒感染。Mi RNA可以通过调节其靶基因从而参与细胞自噬的调控,发挥类似癌基因或抑癌基因的功能。本研究的目的是探寻mi R-224-3p基因簇是否参与了HPV感染引起的宫颈癌细胞自噬的调控过程,以及预测和确定mi R-224-3p直接作用的靶基因及靶蛋白,从而阐明mi R-224-3p在宫颈癌发生和发展过程中的分子机制。【方法】在这项研究中,我们对宫颈病变组织进行了mi RNA基因芯片分析,发现大量的mi RNA在HPV感染的组织中具有差异表达。通过差异性分析确定mi R-224-3p作为选择性上调在HPV感染的组织和细胞系中的候选mi RNA。应用RT-PCR在宫颈病变组织中进行验证。应用Western-blotting验证宫颈组织中自噬相关蛋白P62、LC3表达。通过在不同HPV感染的细胞系中转染mi R-224-3p质粒及其抑制剂验证其调节自噬机制。并应用免疫荧光检验自噬相关蛋白P62在上述转染后细胞株中表达水平。通过Target Scan7.0预测mi R-224-3p靶向基因,并在细胞系中应用双因素荧光酶实验验证,预测并筛选了mi R-224-3p候选靶基因FIP200。通过RT-PCR和Western-blotting方法检测了在宫颈癌细胞系中mi R-224-3p对FIP200的m RNA及蛋白水平的影响。在宫颈癌细胞系中过表达或敲降mi R-224-3p后,用上述相同的方法检测了mi R-224-3p对FIP200表达水平的影响。【结果】基因芯片分析HPV(+)宫颈组织中mi R-224-3p表达明显高于HPV(-)宫颈组织。不同病变阶段的宫颈组织中mi R-224-3p随病变级别的升高明显表达增加。HPV(+)宫颈组织中的自噬相关蛋白LC3表达明显下降,P62蛋白表达明显升高,说明HPV(+)组织中细胞自噬受到抑制。在HPV(-)、HPV16(+)、HPV18(+)细胞系中,转染mi R-224-3p后P62蛋白表达明显升高,以HPV18(+)细胞系最为明显,转染mi R-224-3p-inhibitor后P62蛋白表达明显下降,以HPV18(+)细胞系最为明显,免疫荧光结果同Western-blotting结果。软件预测结果提示FIP200为mi R-224-3p候选靶基因,转染mi R-224-3p后FIP200表达明显下降,转染mi R-224-3p-inhibitor后FIP200表达明显升高。上述结果经统计学分析差异均具有统计学意义,即P<0.05。【结论】HPV感染能够引起mi R-224-3p表达增加及抑制宫颈病变组织中的细胞自噬活性,相同结果在不同细胞系中得到验证。mi R-224-3p的过表达抑制HPV感染的细胞中的自噬,但敲低内源性mi R-224-3p增加相同细胞中的自噬活性。上述结果的出现是mi R-224-3p通过抑制FIP200的表达实现的。