梧州药用野生稻内生菌多样性及其耐镉特性研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:boshi9529
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植物内生细菌由于其对宿主植物的促生长和协助宿主植物拮抗生物或非生物逆境的作用,已经受到广泛研究。其主要的研究是新种挖掘、微生物肥料开发以及新药研发等方面。而重金属镉污染日益严重,严重影响了人类的日常生活和生产。挖掘药用野生稻内生细菌多样性,探索内生细菌对重金属镉胁迫的耐受性,利用耐镉内生菌降低水污染中的镉含量,此也已经逐步成为当前环境治理的热点。本研究以广西梧州药用野生稻为试验材料,采用多种培养基进行内生细菌的分离纯化。运用随机插入序列指纹图谱(IS-PCR指纹图)对所分离得到内生菌聚类,测定类群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析内生菌进化系统发育。测定各类群菌株的生理生化特性,得到具有较强促生长特性内生菌;以及筛选具有耐镉能力菌株,应用于不同浓度镉样液,分析其耐镉以及降镉能力。本研究以广西梧州药用野生稻为试验材料,采用多种培养基进行内生细菌的分离纯化,得到162株内生细菌;并运用随机插入序列指纹图对所分离得到内生菌聚类,共分为19个类群。测定各类群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析内生菌进化系统发育,分离得到内生菌属于Kosakonia sacchari、Kosakonia oryzae、Paenibacillus oceanisedimins、Klebsiella pneumonia subsp pneumoniae、Achromobacter pulmonis、Klebsiella varricola、Enterobacter oryzendophyticus、Citrobacter freundii、Klebsiella pneumonia subsp rhinoscleromatis、Pseudomonas hibiscicola、Herbaspirillum seropedicae、Fictibacillus enclensis、Stenotrophomonas maltophilia、Bacillus aerophilus、Archromobacter xylosoxidans、Bacillus methylotrophicus、Bacillus tequilensis、Bacillus aryabhattai、Bacillus cerus。测定各代表菌株生理生化特性,并且综合分析发现菌株HS233、WH18、WH24、WH07具有良好的促生长特性。并且有9类菌株具有固氮酶活性,其酶活性范围在1.548-108.482 nmol·mL-1·h-1。通过对19株类群代表菌株耐镉筛选,得到两株具有耐镉生长的内生菌,其分别为Kosakonia sacchari HS233和Bacillus cerus Y10。其均可以利用多种碳源中生长,对盐的耐受性也较好,并且可以在较宽的pH条件下生长;而菌株Kosakonia sacchari HS233利用的碳源较Bacillus cerus Y10丰富,且还具有更加好的广谱抗生素效果。在浓度100μM、200μM和400μM镉样液中,菌株Kosakonia sacchari HS233可以降低镉含量分别达到99.86%、93.24%和91.81%;菌株Bacillus cerus Y10降低样液中镉含量分别为99.78%、79.44%、52.29%。在镉浓度500μM(56.25 mg·L-1)处理下,菌株Kosakonia sacchari HS233合成的胞外蛋白巯基含量是对照组的3.16倍,而胞内含巯基蛋白含量则无明显变化;菌株Bacillus cerus Y10合成的胞内蛋白巯基含量是空白的11.22倍,而菌体合成的胞外蛋白巯基含量相差不远,但是其也可以分泌胞外蛋白或者小分子物质与有效镉结合,使有效镉沉默,但是其分泌的含巯基蛋白含量相对较低。巯基含量测定也与样液镉含量测定结果相互吻合,并且表明在不同浓度的镉样液中,都可以吸附大量的有效镉,同时也可以分泌胞外产物,其中含有巯基胞外蛋白就是一种。此也说明镉浓度越高,微生物对镉的修复程度越小,因此在应用实际时,可以补充额外碳源促使菌体继续增长,吸附样液中大量的镉;或者将菌株作为生物污泥,循环处理污水。而应用于土壤时,可以制成微生物肥料,其可以分泌大量的胞外产物,释放与土壤之中,而土壤可以起到滤膜的作用,从而减少植物根周围的镉含量。
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