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目的:1.探讨HP影响丙肝病情中,Treg细胞的作用机制;2.健脾清化方取得显著临床疗效的具体作用靶点及中医病机,为进一步深化中医药对二者合并干预的研究提供依据,为中医药免疫干预策略阻断丙肝疾病进程提供新的可能。方法:1.分别采集丙肝合并H.pylori感染的患者(观察组)及丙肝未合并H.pylori感染的患者(对照组)的血清,记录两组患者一般资料及肝功能(ALT、AST)数据,Real-timePCR法检测两组患者外周血Treg细胞特异性关键因子FoxP3的基因表达情况,统计对比两组间的差异。2.SPF级8周龄丙肝结构基因转基因模型大鼠及SPF级8周龄健康大鼠,饲养于河南中医学院第一附属医院中心实验室动物房。2.1所有进行试验的大鼠灌胃处理前禁食12小时,禁饮水4小时,灌胃后继续禁止饮食及进水4小时。经预处理后HP标准菌株SS1可在SPF级丙肝结构基因转基因模型大鼠成功定植。2.2建模完成后,通过随机对照方法,随机分为空白组,模型对照组、健脾清化方组、丽珠得乐组,各组大鼠均给予普通标准饲料喂养,按照分组给予药物处理,模型对照组、空白组正常喂养,持续4周;健脾清化方组大鼠灌胃健脾清化方15g/kg/d,持续4周;丽珠得乐药物组用丽珠得乐水溶液灌胃,0.2g/kg/d,共4周。各组大鼠在末次灌胃给药治疗6h后,处死大鼠,收集新鲜的大鼠胃黏膜组织行快速尿素酶试验,收集大鼠肝脏液氮速冻转至-80℃保存备用,新鲜脾脏标本用于流式检测。2.3 Western blot检测各组小鼠肝组织中IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α的表达;流式细胞学技术检测各测试组小鼠脾脏组织中Th17、Treg细胞的比例。结果:1.丙肝合并HP感染患者外周血FoxP3的基因相对表达水平,显著高于对照组(P<0.05);2.丙肝合并HP感染患者肝损伤程度均显著高于非HP感染对照组(P<0.05);3.Western Blot检测显示HCV与HP协同致病所致的丙肝结构基因转基因模型小鼠肝组织中IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α的表达较正常小鼠显著上调,健脾清化方可下调慢性肝损伤小鼠肝组织中IL-2、IL-12、TNF-α的表达;4.流式细胞术检测脾脏细胞中CD4~+CD25~+Treg细胞、Th17细胞比例变化,与空白组比较,模型对照组、健脾清化方组、丽珠得乐组Treg细胞比例明显升高(P<0.05),而Th17细胞比例同样显著升高,健脾清化方可调节丙肝结构基因转基因模型小鼠体内的Treg细胞及Th17细胞的比例。结论:1.丙肝合并HP感染患者的Treg细胞水平显著升高。2.健脾清化方可下调丙肝结构基因大鼠肝组织中IL-2、IL-12、TNF-α的表达,逆转HCV与HP协同致病所导致的以Treg细胞介导的Th1/Th2的失衡机制。3.健脾清化方可同时调节Treg细胞及Th17细胞的比例,纠正Th17/Treg比例的失调,恢复失衡的免疫紊乱机制。