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目的 先天性马蹄内翻足（congenital clubfoot，CCF）是常见的严重危害儿童健康的先天四肢畸形之一。发病率为1‰-8‰不等。CCF的病因目前不明确。遗传流行病学研究认为遗传因素在CCF的发病过程中起着重要作用，一般认为属多基因遗传。国内对CCF的病因研究报道不多，而且大部分从病理学角度去研究，从分子水平研究其发病机理的较少。Hox基因长久以来被认为是控制脊椎动物胚胎发育及器官形成的主要基因。众多的动物实验研究表明Hox基因参与调控肢体的骨骼发育。最近又有报道HoxA基因在肢体肌前体的发育中起重要作用。我科前期研究发现HoxD基因与CCF存在相关关系。本实验以HoxA基因作为CCF的候选基因。选择HoxA所在区域的微卫星位点D7S1808和D7S516对54个核心家系进行TDT检验，以确定HoxA基因与CCF的相关关系，为揭示CCF的发病机制奠定基础。 方法 1．收集样本 收集CCF患者及其父母的外周静脉血2ml。CCF患者均有典型的临床表现，经X光片及手术确诊，并排除其他原因引起的马蹄内翻足样畸形。 2．选取微卫星位点 从人类基因组数据库（GDB）选取HoxA基因附近的一个四核苷酸重复的微卫星DNA标记D7S1808和一个二核苷酸重复的微卫星位点D7S516。PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成。 3．基因型分析及TDT检验 饱和氯化钠法提取基因组DNA。 同位素掺入PCR扩增微卫星DNA：PCR反应总体积10μl，其中加入比活度3μCi／pmol、比浓度为10μCi／μl的α32p-dCTP 0.1μl；PCR反应条件：D7S1808：94℃ 45sec、56℃ 45sec、72℃ 1min循环35次。D7S516：94℃3Osee、56℃30see、72℃45seC循环35次。 6%变性聚丙烯酞胺凝胶电泳:取扩增产物与变性载样缓冲液的混合物3讨，经6%变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分离等位基因，电泳条件:1 xTBE，80W，循环水温度30℃，电泳时间3一5小时。 自显影及洗片:将凝胶转移至滤纸并加盖保鲜膜，后置于暗盒内，一70℃冰箱自显影6一18小时，洗片，照相。 基因型分析及TDT检验:双盲法判定等位基因型并记录。建立TDT表格，计算XZ值，判定P值，进行TDT检验及相关分析。结果 1 .D7s516位点、D7S1808位点等位片段及核心家系等位片段传递情况检测结果。D7 5516位点可以检测出7个等位片段;D7 51 808位点可以检测出7个等位片段; 2.TDT检验结果。D7S516位点的等位片段传递情况;D751808位点等位片段传递情况;TDT检验结果可见D7 5516处存在传递不平衡（X2=20.‘3s46P<0.01）;D7Slsos处不存在传递不平衡（XZ=11.3196p>0.05）; 3.我国北方人群中D7 51 808位点各个等位基因的频率分布情况。结论 1.D7ssl6位点可以检测出7个等位基因，它与CCF存在传递不平衡，提示HoxA基因与先天性马蹄内翻足发病可能有相关性。 2.D751808位点可以检测出7个等位基因，它与CCF不存在传递不平衡。