三羟异黄酮——genistein(4’5,7-Trihdroxyisoflavone)是大豆中一种主要异黄酮，被认为具有包括抑制血管增生，抗氧化和抗癌等多向性作用。根据流行病学研究，动物模型显示，genistein对乳腺癌、肠癌、黑色素瘤、皮肤癌等有确定的化学预防作用。国外研究证实，genistein能有效的抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞分化或凋亡，抑制血管生成和蛋白酪氨酸激酶(PTK)的活性。另外对与细胞凋亡和周期相关的基因表达研究发现，genistein处理黑色素瘤细胞后可以引起Bcl-2和p53基因表达的下调和Bax、P21 WAFI基因表达的上调。且可以使Chk2活化，并抑制Cdkl蛋白的表达。近年来，国内研究也在蛋白水平和mRNA水平得到比较类似的结果。但是，genistein抑制细胞增殖的分子机理与其对肿瘤细胞的哪些抑制作用相关还没有得到明确的结论，大多数学者倾向于genistein对肿瘤细胞的增殖抑制作用与细胞凋亡和周期抑制两条途径相关。基于这些发现，本课题从genistein对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖抑制、周期阻滞以及相关蛋白和mRNA水平研究等方面加以证明和探讨，为进一步了解genistein对肿瘤细胞的增殖抑制作用的分子机理提供新的思路。 第一部分 Genistein对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖和细胞周期的影响 本试验应用MTT比色法、光镜及荧光显微镜观察和流式细胞技术，以人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S为靶细胞，探讨Genistein对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖和细胞周期的影响。以0.0、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0μmol/L的genistein浓度分别处理细胞，在2天、4天、6天用MTT法分别检测OD值。结果发现，genistein在低浓度(＜12.5μmol／L)时，出现轻微促进MDA-MB-435S细胞增殖的作用；但当genistein的浓度＞20μmol／L时，随着作用时间的延长和浓度的增大，出现越来越明显的细胞增殖抑制作用。光镜观察显示对照组genistein浓度为0μmol／L时，细胞呈正常生长时的梭形，当genistein的浓度≥20μmol／L时，处理后的细胞皱缩，变圆变小，且随浓度的增大此形态变化更加明显。在荧光显微镜下，低浓度组未见典型凋亡核，而当浓南京医科大学硕士学位论文度逐渐增大，凋亡核亦逐渐增多。流式细胞技术检测细胞周期结果显示:genistein在低浓度(<一2.5林mol/L)时，有比对照组(o林mol/L genistein)更少的停留在02一M期的细胞百分比;但当genistein的浓度》20林mof/L时，随着作用时间的延长和浓度的增大，出现越来越明显的GZ一M期阻滞作用。genistein对人乳腺癌细胞MDA一MB一4355的作用机理可能与其对细胞凋亡和细胞周期的影响有关.