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目的在组织工程技术的指导下,利用壳聚糖、明胶等组织工程材料构建成膜,探讨这几种组织工程膜搭载、转运黑素细胞的可行性,为进一步应用于临床治疗色素脱失性疾病提供基础。方法将壳聚糖、明胶等组织工程材料按照不同比例用乙酸融为凝胶,灌注于六孔细胞培养板中烘焙成膜;浸渍法检测膜材料的组织相容性;透射电镜观察膜体的断层结构,明确该类组织工程膜的立体形态;在膜上接种经培养的黑素细胞,观察黑素细胞在膜上完成贴附所需要的时间;使用倒置显微镜、扫描电镜技术观察黑素细胞在膜上贴附情况;MTT法、NaOH裂解法等方法测定黑素细胞在膜上的生长以及合成黑素情况;将搭载黑素细胞的组织工程膜移植到裸鼠皮肤上,使用激光共聚焦显微镜和免疫组化技术检测裸鼠移植部位的黑素细胞情况,并用荧光染色技术观察膜上黑素细胞残留情况,以判断膜上黑素细胞转移情况。结果该研究中所制作的不同比例的膜,不影响黑素细胞正常生长,显示本研究中采用壳聚糖和明胶与黑素细胞具有良好的组织相容性;透射电镜显示壳聚糖-明胶各比例混合膜膜体具有明显的三维立体结构,而纯壳聚糖膜体的三维结构不明显,明显的三维立体结构有利于含蓄培养液以及为黑素细胞在移植部位定植提供较好的微环境;黑素细胞能够在3H内在各种膜上完成贴附,其中黑素细胞在2:1比例的壳聚糖-明胶膜上贴附时间最短,2H即可有95%以上的细胞完成贴附,这可能与明胶具有很好的细胞贴附亲和性有关,而纯壳聚糖膜上贴附时间较长,需要3H时间,并且在接种后的1H只有50%左右的细胞贴附;倒置显微镜和扫描电镜观察到黑素细胞在聚糖膜上分布均匀,贴附良好;利用MTT法测定的增殖曲线显示,黑素细胞在各比例的膜上均能生长,其中2:1比例的壳聚糖-明胶组织工程膜支持黑素细胞生长情况好于其他膜,约4 D时间黑素细胞可以增殖1倍,而其他种类的膜情况略差,5-6 D才可以增殖1倍;NoOH裂解法测定的黑素含量增长曲线与MTT曲线相同,进一步证实了不同组织工程膜支持黑素细胞生长增殖的性能;激光共聚焦显微镜可以观察到各组裸鼠的移植部位均含有黑素细胞,而对照部位没有黑素细胞;移植部位组织切片经Melan-A单克隆抗体免疫显像,结果为阳性,移植后的膜经荧光染色于倒置显微镜下观察,显示膜上黑素细胞残留量很少。结论壳聚糖膜和2:1、1:1和1:2比例的壳聚糖-明胶混合组织工程膜均与黑素细胞具有良好的亲和性,能够支持黑素细胞在其上贴附、生长、增殖,并且支持搭载的黑素细胞向动物移植床部位转移,可以作为转载黑素细胞的载体材料,其中2:1比例的膜性能最优,具有良好的临床应用前景。