ERRα通过抑制β-catenin促进猪前体脂肪细胞成脂分化

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成脂分化是研究最多的细胞分化模型之一,它是一个多因子多阶段参与调控的复杂过程。在这个过程中, ERRα和wnt/β-catenin信号通路都起到重要作用,而β-catenin作为细胞内第二信使,在介导wnt信号传递过程中起着关键作用。有许多研究表明ERRα能够促进脂肪生成,wnt/β-catenin信号通路能够抑制脂肪生成,但在成脂分化过程中,关于ERRα和wnt/β-catenin信号通路之间的作用几乎没有人报导。近来有研究发现在成骨分化过程中,ERRα单独作用时,能够抑制wnt/β-catenin信号通路;ERRα与ERRα辅受体PGC-1α相结合时,能够促进wnt/β-catenin信号通路激活。但并没有发现ERRα作用于wnt/β-catenin信号通路中具体哪个因子,而且这种作用在成脂分化过程中也没有报导。本研究以1-3日龄长白仔猪为实验动物,分离培养猪前体脂肪细胞,Western Blot和RT-PCR分析在成脂分化过程中,ERRα和β-catenin的表达模式。利用β-catenin逆转录病毒超表达载体和ERRα腺病毒超表达载体,分别在293T和293A细胞中包装产生病毒,并侵染猪前体脂肪细胞。细胞免疫荧光检测ERRα和β-catenin的表达情况。并利用β-catenin特异性激活剂LiCl和ERRα特异性抑制剂XCT790处理猪前体脂肪细胞。Western Blot检测ERRα腺病毒超表达和ERRα特异性抑制XCT790处理后,猪前体脂肪细胞ERRα的表达情况。并将培养的前体脂肪细胞根据不同处理分为五组,分别用ERRα侵染、ERRα侵染并添加LiCl处理、LiCl处理、XCT790处理和空处理。利用油红O染色检测其脂滴形成情况。并利用Western Blot和RT-PCR检测成脂过程中ERRα、β-catenin和成脂标志基因SREBP-1c的表达情况。最后,综合分析,明确在成脂分化过程中,ERRα与β-catenin的作用关系,主要研究结果如下:1. β-catenin逆转录载体包装能够产生β-catenin逆转录病毒,但病毒滴度太低,不能很好的侵染猪前体脂肪细胞。ERRα腺病毒载体包装能够产生ERRα腺病毒,产生腺病毒滴度滴度很高,能够很好的侵染猪前体脂肪细胞。2. Western Blot和RT-PCR结果都表明,在成脂分化过程中,ERRα表达上调,而β-catenin表达下调,SREBP-1c随分化时间延长,表达上调。表明在成脂分化过程中,ERRα和β-catenin之间可能存在互作关系。3. Western Blot结果显示,包装产生的ERRα腺病毒能够促进猪前体脂肪细胞中ERRα蛋白表达,而10umol/L的XCT790能够有效的抑制ERRα蛋白表达。4.油红O结果表明ERRα能够促进脂滴形成,而LiCl抑制脂滴形成。ERRα腺病毒侵染并用LiCl处理后,与对照组相比,脂滴生成作用并没有明显被抑制。5. Western Blot结果显示,在成脂分化过程中,LiCl能够稳定β-Catenin表达,并抑制SREBP-c表达,ERRα抑制β-Catenin表达,促进SREBP-1c表达。而RT-PCR结果表明LiCl并不能够促进β-Catenin mRNA表达,而ERRα能够抑制β-Catenin mRNA表达。综上所述,在成脂分化过程,ERRα通过抑制β-catenin蛋白表达,进而抑制wnt/β-catenin信号通路的抑制脂肪生成的作用,进一步提高成脂分化。β-catenin逆转录载体包装产生的逆转录病毒滴度太低,还需要进一步提高病毒滴度以有效侵染猪前体脂肪细胞。
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