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目的:肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各类慢性肾脏疾病进展变成终末期肾脏病共同的病变过程,它的病理特征主要表现为正常肾间质和肾小管的结构被大量堆积的细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)所取代,如Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白等,导致肾小管间质纤维化和肾小球硬化,最终导致肾功能丧失,是一个由炎症反应、氧化应激、多种细胞因子和信号转导通路的激活等共同配合参与的复杂过程。Chemerin是近些年来新确定的一种脂肪细胞因子,它具有类似炎症因子的趋化作用,能够通过NF-κB、JAK/STAT、TGF-β1多种信号通路参与炎症反应,并且与糖尿病肾病、肿瘤和冠状动脉粥样硬化等多种疾病相关。在肾脏疾病领域的研究中,发现Chemerin作为炎症因子参与了糖尿病肾病和慢性肾功能不全,且其表达水平与转化生长因子TGF-β1,结缔组织生长因子CTGF,肿瘤坏死因子TNF-α等呈正相关,可以预测肾功能损害。TGF-β1作为一个公认的重要炎症因子,它能够刺激细胞外基质积聚并损害肾功能;而且已有研究发现TGF-β1因子和它下游的Ⅲ型胶原,在经典的单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral occlusion,UUO)致肾间质纤维化动物模型中发挥重要作用。然而国内外以往关于chemerin与肾间质纤维化关系的研究,大多都是应用糖尿病肾病模型,较少应用单侧输尿管梗阻模型研究。雷公藤多苷具有抗炎、免疫调节及抗癌等作用,目前广泛应用在治疗肾病及其他自身免疫系统疾病。本实验目的是在SD大鼠UUO模型中,观察肾组织Chemerin、TGF-β、Ⅲ型胶原的表达情况,和其在肾间质纤维化中的作用,以及应用雷公藤多苷后对其表达情况的影响,为肾间质纤维化的防治提供新的实验基础及治疗靶点。方法:清洁级健康雄性SD大鼠72只,体重(200±20)克,经1周适应性喂养后,随机分为A、B、C、D 4组:假手术组(分离左侧输尿管但不结扎)、UUO组(结扎左侧输尿管近肾盂段)、UUO低剂量雷公藤多苷干预组及UUO高剂量雷公藤多苷干预组。自造模当日起,C组给予雷公藤多苷(10mg/kg/d)灌胃,D组给予雷公藤多苷(20mg/kg/d)灌胃,余下两组给等体积的生理盐水灌胃。实验时期动物可正常饮食饮水,每天密切观察大鼠的一般状态,饮食和活动是否有异常,按照大鼠体重调整给药剂量。术后第3、7、14天在每组大鼠中分别随机抽取6只处死,留肾组织行相关检查。用0.9%盐水充分清洗组织后分为两部分,一部分放进10%中性福尔马林溶液固定,病理切片后用于做HE、Masson染色及免疫组化,评估各组不同时刻肾间质病变的水平;另一部分肾组织放进液氮立刻冷冻后转存至-80℃冰箱,待测Western blot。所测得数据采用SPSS21.0软件统计后进行分析,认为P<0.05差别有统计学意义。结果:1肾脏组织病理形态改变1.1肉眼观察:剖解后肉眼可见A组肾脏颜色及大小正常。B、C、D三组左侧肾脏随梗阻时间延长体积逐渐增大,肾皮质逐渐变薄,其中B组肾脏增大最为明显,C、D两组均较其减轻。1.2 HE及Masson染色A组肾脏结构正常,肾小管及肾间质无明显病理改变。B组:肾脏构造受到破坏,术后第3天观察部分肾小管上皮细胞脱落,肾小管扩张,局部炎性细胞浸润,肾间质少量胶原纤维沉积着色。第7天时肾小管明显扩张且数目增长,肾间质大量炎性细胞浸润,间质宽度增加,出现纤维化改变,增宽的间质区域胶原纤维着色增多。第14天肾小管结构破坏严重,肾间质纤维化程度加重,胶原纤维沉积着色更加明显。同时期病变程度最严重的是B组,C、D组病变水平均减轻,但仍然重于A组,且D组病变水平较C组减轻明显。2免疫组化2.1 Chemerin:A组肾小管上皮细胞中Chemerin少量散在表达。B组肾小管上皮细胞中的阳性表达明显增多,以胞浆表达最为明显。且随着梗阻时间的延长,Chemerin的阳性表达逐渐增多,与相同时期的A组相比有统计学差异(P<0.05)。与同一时期B组相比较,C、D两组,Chemerin的阳性表达均有明显下降,且D组较C组下降更加明显(P<0.05),但其阳性表达水平仍高于同一时期的A组水平(P<0.05)。2.2 TGF-β1:A组肾小管上皮细胞中TGF-β1的表达很少。B组肾小管上皮细胞及肾间质中阳性表达明显增多,且随着梗阻病变时间的延长表达量持续增多。与相同时期的A组相比有统计学差异(P<0.05);与同一时期B组相比较,C、D两组,TGF-β1的阳性表达均有明显下降,且D组较C组下降更加明显(P<0.05),但其阳性表达水平仍高于同一时期的A组水平(P<0.05)。2.3Ⅲ型胶原蛋白:A组肾小管上皮细胞、间质细胞中可见散在少量表达。B组肾小管上皮细胞中阳性表达明显增加,且随着梗阻病变时间的延长表达量持续增加。与相同时期的A组相比有统计学差异(P<0.05);与同一时期B组相比较,C、D两组,Ⅲ型胶原的阳性表达均有明显下降,且D组较C组下降更加明显(P<0.05),但其阳性表达水平仍高于同一时期的A组水平(P<0.05)。3 Western Blot结果:从图片及图像分析结果可以看出,与同期A组相比,第3、7、14天B组肾组织中Chemerin蛋白的表达量均明显增加(P<0.05);与同一时期B组相比较,C、D两组,蛋白表达量均有明显下降,且D组较C组下降更加明显(P<0.05),但其阳性表达水平仍高于同一时期的A组水平(P<0.05)。结论:1脂肪因子Chemerin参与UUO致肾间质纤维化的发展过程,并且其表达随着肾间质损伤程度加重逐渐增加,提示其可能有促进肾间质纤维化作用;2雷公藤多苷可通过下调UUO大鼠Chemerin在肾小管间质中的表达,进而抑制TGF-β1、Ⅲ型胶原信号通路,减轻炎症反应,从而达到减轻和延缓肾间质纤维化的作用。