目的:探讨5-氨基酮戊酸(5-aminolevulnilic acid,ALA)光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFB)周期影响及调控机制的研究。方法:1.采用组织块培养方法,分别体外培养KFB和正常皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSFs),观察其生物学特征;应用抗波形蛋白抗体做免疫细胞化学鉴定,证实为成纤维细胞(fibroblast,FB)。2.KFB传代培养后,选用第3-5代对数生长期的KFB进行实验,分别加入含有ALA 0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0mmol/L、2.0mmol/L、4.0mmol/L、8.0mmol/L的无血清高糖DMEM培养液,避光培养4h后,光动力仪照射,光源距离15cm,波长630nm,光照密度为100m W/cm~2,光照时间分别为100s、200s、400s、800s、1200s(即光照能量分别为10J/cm~2、20J/cm~2、40J/cm~2、80J/cm~2、120J/cm~2)。继续培养24h后,采用CCK8法检测增殖活性,选出最优光敏剂浓度+光照能量组合(ALA浓度为4.0mmol/L,PDT能量为80J/cm~2)用于实验。3.将传代培养的生长情况良好的KFB分为4组,即空白对照组,ALA+PDT组(AP组),p79350(p38 MAPK信号通路激动剂)+ALA+PDT组(PAP组),SB203580(p38 MAPK信号通路阻断剂剂)+ALA+PDT组(SB组);正常皮肤成纤维细胞组标记为HSFs组,以ALA浓度为4.0mmol/L,PDT能量为80J/cm~2(最优光敏剂浓度+光照能量组合)进行干预KFB各分组,流式细胞仪检测各组FB细胞周期中细胞分布比例;Western Blot法检测各组中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷酸化p38细胞丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)表达情况。结果:1.组织块接种成功后约7天可见细胞形态呈长梭形或三角形,边缘向外伸出数个突起;抗波形蛋白抗体免疫鉴定为阳性,证实其为成纤维细胞。2.CCK8检测结果显示:ALA-PDT干预后,KFB活性受到抑制,且在一定的范围中,KFB的活性随着ALA浓度、PDT能量的增大而降低。3.流式细胞仪检测提示:五组细胞均以G0/G1期细胞为主峰,空白对照组中细胞S期峰值高于HSFs组,S期细胞比例显著增高(49.32+2.8%),PI具有统计学差异(P<0.05);AP组、PAP组、SB组中S期峰值均低于空白对照组,S期细胞比例显著降低,分别为(20.26+2.5%、24.45+2.3%、16.97+2.6%),PI具有统计学差异(P<0.05);AP组中S期细胞峰值高于SB组(16.97+2.6%),低于PAP组(24.45+2.3%),PI具有统计学差异(P<0.05)。4.Western Blot法检测提示:空白对照组中Cyclin D1表达明显高于HSFs,AP组、PAP组、SB组中Cyclin D1、p-p38MAPK表达显著低于空白对照组,AP组中Cyclin D1、p-p38MAPK表达高于SB组,低于PAP组,差异均具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.p-p38 MAPK/Cyclin D1在KFB中的异常表达可导致成纤维细胞的异常增殖;2.ALA-PDT对KFB增殖周期起抑制作用,其作用机制可能与抑制p38 MAPK信号通路及降低Cyclin D1表达,从而诱导KFB发生G1期阻滞有关。