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1.目的:观察中药参地颗粒对膜性肾病脾肾亏虚证患者的临床疗效及其对内质网应激和足细胞自噬的影响。2.方法:选取60例膜性肾病（MN）中医证型为脾肾亏虚证的患者作为研究对象,随机分组为参地颗粒组、缬沙坦组,所有患者均予以西医基础治疗,参地颗粒组加用参地颗粒,缬沙坦组加用缬沙坦胶囊,疗程共12周。试验过程中共脱落10例,最终完成50例（参地颗粒组24例,缬沙坦组26例）。观察两组治疗前后的西医临床疗效、中医证候疗效及积分值、24h尿蛋白定量（24h Upro）、尿白蛋白/尿肌酐（UACR）、尿液中Podocalyxin、Nephrin蛋白含量、血清中GRP78、CHOP、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达变化情况并进行疗效评价。另于我院体检中心选取20例健康人员作为正常对照组,收集其尿液标本检测Podocalyxin、Nephrin蛋白表达水平,收集血标本用于检测GRP78、CHOP、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达水平。3.结果3.1临床疾病疗效:参地颗粒组患者临床疾病疗效总有效率为79.17%,缬沙坦组患者临床疾病疗效总有效率为50.00%,两组比较差异显著（P＜0.05）。3.2中医证候疗效:参地颗粒组和缬沙坦组中医证候疗效总有效率分别为83.33%和42.31%,两组比较差异显著（P＜0.05）。3.3中医证候积分:治疗前,两组积分值之间比较无显著差异（P＞0.05）;治疗12周后,参地颗粒组中医证候积分值较治疗前显著降低（P＜0.05）,而缬沙坦组中医证候积分值较治疗前降低不明显（P＞0.05）,且参地颗粒组优于缬沙坦组（P＜0.05）（P＜0.05）。3.4 24h Upro、UACR比较:治疗前参地颗粒组和缬沙坦组24h Upro、UACR无显著差异（P＞0.05）,治疗第8周和12周时,两的24h Upro、UACR与治疗前相比均有显著下降（P＜0.05）,且治疗12周时参地颗粒组24h Upro、UACR的下降程度显著优于缬沙坦组（P＜0.05）。3.5尿podocalyxin、Nephrin比较:治疗前,缬沙坦组和参地颗粒组患者的尿液podocalyxin、Nephrin含量较正常组均显著升高（P＜0.05）。治疗后两组患者尿液podocalyxin、Nephrin含量与同组治疗前相比均显著降低（P＜0.05）;且治疗后,参地颗粒组的尿Nephrin含量显著低于缬沙坦组（P＜0.05）。3.6血清GRP78、CHOP蛋白表达比较:治疗前,缬沙坦组和参地颗粒组患者血清中GRP78、CHOP蛋白表达水平均显著高于正常组（P＜0.05）。与治疗前比较,治疗后参地颗粒组血清中GRP78、CHOP蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;而缬沙坦组GRP78、CHOP的治疗前后比较无显著差异（P＞0.05）。3.7血清中LC3-Ⅱ、Beclin1表达水平比较:治疗前,与正常组比较,缬沙坦组和参地颗粒组患者血清中Beclin1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,而LC3-Ⅱ有升高趋势,但是差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后参地颗粒组血清中Beclin1蛋白表达水平与治疗前比较有进一步升高（P＜0.05）,但是缬沙坦组治疗前后无显著差异（P＞0.05）。3.8安全性指标:在12周观察周期内,各组患者安全性指标无明显变化。4.结论4.1膜性肾病患者出现内质网应激及足细胞损伤,并激活了自噬。4.2具有健脾益肾固精功效的中药参地颗粒可以有效缓解膜性肾病脾肾亏虚证患者的临床症状,降低尿蛋白水平,且安全性良好。4.3参地颗粒能够通过增强自噬,并适度抑制内质网应激,进而减轻足细胞损伤,这可能是参地颗粒发挥对膜性肾病治疗作用的机制之一。1.目的:观察中药参地颗粒对阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）诱导的肾炎大鼠肾脏内质网应激和足细胞自噬的影响,探讨参地颗粒对足细胞损伤的干预机制。2.方法:选用雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常组、模型组、参地颗粒组、缬沙坦组,每组10只。除正常组外,其余大鼠均采用大鼠尾静脉注射C-BSA建立MN模型,测定尿蛋白阳性提示造模成功。参地颗粒组和缬沙坦组分别予以参地颗粒水溶液、缬沙坦胶囊混悬液灌胃,正常组、模型组大鼠予等量生理盐水灌胃,每天1次,连续治疗8周。8周后处理动物、留取尿液、血液和肾脏标本。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠尿液中尿白蛋白（U-ALB）、尿肌酐（U-Cr）、尿白蛋白/尿肌酐（UACR）、血肌酐（SCR）和尿素氮（BUN）浓度;蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测肾脏组织中GRP78、CHOP、Nephrin、Podocin、LC3-Ⅱ、Beclin1、P62蛋白表达情况;免疫荧光法检测肾组织中自噬标志物LC3-Ⅱ、足细胞标志分子WT-1的表达情况;电镜观察足细胞的形态及结构变化、自噬小体形态。3结果:3.1 U-ALB、U-Cr、UACR变化情况:与正常组比较,模型组尿液中U-ALB、U-Cr、UACR均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,参地颗粒组和缬沙坦组U-ALB、U-Cr、UACR均显著降低（P＜0.05）;与缬沙坦组比较,参地颗粒组的U-ALB、UACR显著下降（P＜0.05）,U-Cr差异不够显著（P＜0.05）。3.2 Scr、BUN变化情况:与正常组比较,模型组大鼠Scr、BUN在造模后显著增加（P＜0.05）;与模型组比较,参地颗粒组和缬沙坦组大鼠Scr、BUN显著降低（P＜0.05）,且参地颗粒组较缬沙坦组下降更为明显（P＜0.05）。3.3 Nephrin、Podocalyxin蛋白表达情况（Western blot法）:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中Nephrin、Podocalyxin蛋白相对表达量显著减少（P＜0.05）。与模型组比较,参地颗粒组大鼠肾组织中Nephrin、Podocalyxin表达量均显著升高（P＜0.05）;缬沙坦组大鼠肾组织中Podocalyxin表达量显著升高（P＜0.05）,而Nephrin变化无显著差异（P＞0.05）。3.4肾组织GRP78、CHOP蛋白表达情况（Western blot法）:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中GRP78、CHOP蛋白相对表达量上调（P＜0.05）;与模型组比较,参地颗粒和缬沙坦组大鼠肾组织中GRP78、CHOP表达量均显著减少（P＜0.05）,但两治疗组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。3.5 LC3-Ⅱ、Beclin1、P62蛋白表达情况（Western blot法）:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中的Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著增加,而P62相对表达量显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,参地颗粒组大鼠肾组织中的Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步上调,而P62进一步降低（P＜0.05）;缬沙坦组大鼠肾组织中上述蛋白的表达量与模型组比较无显著差异（P＞0.05）;参地颗粒组大鼠肾组织中的Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著高于缬沙坦组,而P62相对表达量则显著低于缬沙坦组（P＜0.05）。3.6电镜观察足细胞的形态及结构变化、自噬小体形态:正常组大鼠的肾小球足细胞结构正常,基底膜厚度正常,上皮下未见电子致密物形成,足细胞内可见少量自噬小体。模型组大鼠的足突可见大部分融合或消失,基底膜弥漫性增厚,上皮下可见电子致密物沉积,足细胞内自噬小体数量较正常组增多。参地颗粒组和缬沙坦组大鼠的肾小球足突融合程度较模型组减轻,基底膜轻度增厚,伴有少量电子致密物沉积;参地颗粒组大鼠的足细胞内自噬小体数量与模型组比较明显增多,而缬沙坦组大鼠的足细胞内自噬小体数量与模型组大致相当。3.7免疫荧光法检测肾组织中LC3-Ⅱ、WT-1表达情况3.7.1正常组大鼠的肾小球内LC3-Ⅱ表达较少,WT-1表达较多。模型组大鼠的肾小球内LC3-Ⅱ表达有所增加,WT-1表达减少。参地颗粒组大鼠的肾小球内LC3-Ⅱ表达程度与模型组相比进一步增强,WT-1表达与模型组相比亦有增加。缬沙坦组大鼠的肾小球内LC3-Ⅱ表达程度与模型组大鼠相当,WT-1表达与参地颗粒组相当。3.7.2各组大鼠肾脏LC3-Ⅱ、WT-1表达的平均光密度值比较:与正常组比较,模型组大鼠肾脏LC3-Ⅱ的平均光密度值显著增加,WT-1的平均光密度值显著减少（P＜0.05）。与模型组比较,参地颗粒组大鼠肾脏LC3-Ⅱ和WT-1的平均光密度值均显著增加（P＜0.05）;缬沙坦组大鼠肾脏WT-1的平均光密度值显著增加（P＜0.05）,而LC3-Ⅱ的平均光密度值变化无显著差异（P＞0.05）;且参地颗粒组大鼠肾脏LC3-Ⅱ的平均光密度值还显著高于缬沙坦组（P＜0.05）。4.结论4.1 C-BSA肾炎大鼠出现内质网应激（ERS）增强及足细胞损伤,而足细胞自噬活性也被激活。4.2中药参地颗粒可通过增强C-BSA肾炎大鼠的足细胞自噬活性,并适度抑制肾脏内质网应激,进而减轻足细胞损伤,降低蛋白尿水平。