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背景和研究目的:胆管癌(Cholangiocarcinoma,CC)是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,恶性程度高,对放化疗不敏感,预后极差,五年生存率接近于零。近些年其发病率呈显著的上升趋势。手术根治性切除是目前临床治疗胆管癌唯一有效的治疗手段,但是由于胆管癌起病隐匿,目前影像等检测手段的限制,大部分患者发现时已无法进行手术根治性切除,因此早期发现、早期诊断对改善胆管癌的预后极其重要。本研究的目的是通过蛋白质组学等手段筛选出人胆汁中的潜在的胆管癌生物分子标志物,并验证其相应在胆管癌中的诊断效力。方法:本研究收集临床上合并梗阻性黄疸的胆管癌及胆石症患者胆汁,采用高效反向液相色谱(RPLC)以及液质离子阱质谱仪(LC-MS/MS)技术相结合构建完成了人的胆汁的差异蛋白质表达谱。进一步采用STRING数据库对这些差异蛋白进行生物信息学分析并结合目前的研究进展,挑选出LCN1和PTTG1IP作为潜在的分子标志物,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCN1和PTTG1IP在CC、胆石症患者胆汁中的表达水平,评估其作为新标志物的诊断价值,并从细胞水平采用免疫印迹法(Western blotting)对这两个差异蛋白的表达情况进行了验证和分析。结果:通过RPLC-MS/MS检测出了1985种蛋白质,共发现了285个差异蛋白质,其中198个是在CC患者的胆汁中明显高表达,87个蛋白质在CC患者胆汁中低表达。紧接着我们结合目前的差异蛋白质的研究方面查询相关信息后,我们通过数据库结合目前的研究进展从中挑选了LCN1和PTTG1IP两个蛋白质,并且我们利用ELISA对LCN1和PTTG1IP在CC、胆石症胆汁中的表达水平进行了定量分析,结果提示LCN1和PTTG1IP能很好的将胆管癌和胆石症病人区分开,其敏感度和特异度分别为80%,92%和60%,92%。同时,利用胆管癌细胞及其正常胆管上皮细胞样本进行的免疫印迹的结果也显示这两个蛋白在肿瘤细胞中的表达要显著高于正常细胞。LCN1和PTTG1IP这两个标志物在胆管癌的诊断中明显优于CA19-9、CEA、AFP等指标,可以提高诊断胆管癌的可靠性。结论:综上所述,我们成功的构建完成了胆管癌的胆汁蛋白差异谱系,做出了极高价值的CC诊断的肿瘤相关标志物候选库。后续的研究也明确提示LCN1和PTTG1IP可作为极具潜力的CC诊断标志物及肿瘤治疗的分子靶点。