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对比研究微波凝固与手术切除治疗原发性小肝癌(≤5 cm)对癌细胞播散入血及外周血细胞免疫功能的影响。 预试验 建立巢式-逆转录-聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)检测AFP mRNA试验方法。 资料与方法:(1) 病例选择:原发性小肝癌患者,均经病理证实,单发病灶,无肝内、外转移。(2) 分组:微波凝固术组,19例;手术切除术组,21例。(3) 标本采取:术前、术后30 min、术后1d及术后7d采外周血。(4) 观测指标和方法:提取外周血有核细胞总RNA,逆转录合成cDNA,用常规巢式PCR和实时定量巢式PCR两种方法,观察两种治疗前后,患者外周血AFP mRNA表达动态变化,同时观测外周血CD3、CD4、CD8、CD4/CD8及肝功能动态变化。 结果 (1)肝功能 血清ALT及AST:在手术后升高均较微波组更显著,升高的峰值均在术后1d。血清总蛋白及白蛋白:两组间比较均无显著性差异。血清总胆红素及直接胆红素:手术后升高均较微波组明显。微波术后升高峰值在术后1d,手术组7d。 (2)外周血细胞免疫功能 手术组:与手术前相比,术后30min、1d及7d CD3显著降低;术后30min及1d CD4显著降低,7d恢复术前水平;术后CD8差异不显著。术后30min及1d CD4/CD8降低,7d恢复术前水平。微波组:术后维持在治疗前水平。组间点对点比较:手术后30min及1d CD4较微波组低。 (3)巢式RT-PCR定性检测 AFP mRNA两组所有患者术前外周血AFP mRNA的阳性率为40%(16/40);微波组和手术组均有3例治疗前AFP mRNA阴性患解放军军医进修学院解放军总医院博士学位论文者,术后30m加转为阳性,术后7d又转为阴性;部分患者治疗前AFP mRNA阳性,术后7d转为阴性(微波组2/6,手术组3/9)。两组之间比较无差异。 (4)实时定量巢式RT一PCR检测AFP mRNA两组所有患者中67 .5% (27/40)术前外周血可检出AFP mRNA拷贝数。微波和手术组多数患者术前可检出AFP mRNA,术后升高,峰值均在术后30 min;部分患者术前AFP mRNA拷贝数为0,术后增高;部分患者术后7 d AFP mRNA拷贝数较术前降低。两组之间比较无差异。 (5)随访随访1一16个月不等。微波组1例患者术后8个月多发骨转移,1例10月后肝内复发;手术组2例患者分别于术后4及5个月肝内复发。4例肝内复发或远处转移的患者,治疗前后均有较高的外周血AFP mRNA表达。 结论微波凝固和手术切除治疗原发性小肝癌均可造成外周血AFP mRNA增高,提示癌细胞播散入血增多,高峰期在术后30 min,两组之间总体无差异;手术后7d内患者外周血细胞免疫功能明显降低,谷底在术后30 min,微波凝术后外周血细胞免疫功能得以保护;微波凝固对肝功能损伤较手术切除轻;微波凝固和手术切除治疗原发性小肝癌治疗后,外周血AFP mRNA持续高表达,患者复发转移的可能性较大。