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壳聚糖是一种可降解的天然生物大分子聚合物。由于携带大量正电荷可与DNA通过静电作用形成复合体,壳聚糖已被作为一种非病毒载体而大量应用于基因转染的研究中。本论文主要研究了壳聚糖对肝癌细胞的效应及将壳聚糖与明胶复合物作为一种新载体用于基因的原位转染并进一步研究了其转染效率及转染机制。
本文首先对比了人正常肝细胞L02与人肝癌细胞HepG2在壳聚糖膜表面的生长情况,发现壳聚糖膜仅影响正常肝细胞的形态而不影响其增殖,但却不利于肝癌细胞的生长。通过细胞生长曲线、细胞形态观察、细胞核荧光染色、DNA凝胶电泳等方法,验明了壳聚糖可以诱导肝癌细胞凋亡,并对诱导凋亡的机制进行了初步探究。
本文通过明胶膜以静电作用对壳聚糖-DNA复合物的吸附,制备了一种适用于原位基因转染的三元体系,并对该体系进行了各种表征。扫描电镜观察和细胞毒性实验证明该体系具有较高的生物相容性;细胞转染效率及对靶基因抑制活性实验证实了与脂质体及壳聚糖相比,该体系具有更高的转染效率,其输送的反义寡聚核苷酸(ASO)对靶基因抑制率能达到90%以上。同时,DNA释放实验证明了该体系具有药物缓释作用,通过改变明胶膜的厚度可以调节药物释放速度。
总之,明胶-壳聚糖-ASO三元转染体系具有很好的生物相容性,能有效地原位传输并缓释基因药物,可以广泛应用于ASO、siRNA等小分子基因药物的原位传输。