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沈农马齿苋一号(ShennongPortulaceoleraceaNO.1)是马齿苋科一年生肉质草本植物,是药食两用的植物资源之一。它含有多糖、黄酮类化合物等多种化学成分,在抗菌、降血脂、抗衰老、增强免疫、降血糖等方面具有重要的药理活性;又因其含有丰富的营养成分,具有保健作用,开发前景广阔。因此选择沈农马齿苋一号作为研究对象,并对其多糖进行提取及多糖活性方面的测定,主要结论如下:
(1)实验考察了沈农马齿苋一号多糖的三种提取方法:a.热水法,由正交实验得出的提取条件为:温度100℃、料液比1∶15、时间90min,提取率为14.52%,提取两次合适;b.酶法+热水法,在热水法提取一次之后,自然冷却到50℃,调pH中性,加入纤维素酶0.4mg/g,浸提2h,提取率为17.13%,提取一次;c.低级醇法,第一次低级醇浓度为90%,与马齿苋干粉的浸泡比为4∶1,过滤;第二次低级醇浓度为50%,确定其最佳料液比为1∶12,浸提时间48h,其提取率最高仅为11.25%。因此,酶法+热水法为沈农马齿苋一号多糖的较优化提取工艺。提取液醇沉时的优化条件为3倍体积的95%乙醇,醇沉8h。
(2)实验研究了两种脱蛋白工艺对沈农马齿苋一号多糖的效果。结果显示:Sevage法用了8次将粗多糖中的蛋白脱干净,此法多糖损失多,且成本高;木瓜蛋白酶结合的Sevage法,木瓜蛋白酶水解的时间确定为8h,再用Sevage法重复3次就可将粗多糖中的蛋白脱干净,此法多糖损失少,节约资源。
(3)利用DEAE—纤维素离子交换柱和SephadexG-200凝胶层析柱,对脱蛋白的沈农马齿苋一号多糖进行了进一步的分离纯化。DEAE-纤维素柱得三个组分:POLⅠ、POLⅡ和POLⅢ,再把这三种组分分别过SephadexG-200柱,得三个主要的精制组分:POLⅠB、POLⅡA及POLⅢ’。纯度鉴定结果显示,这三个精制组分都是分子量分布均一的多糖,理化性质分析结果显示,这三个精制组分都具有明显的多糖性质,是多糖化合物,非淀粉多糖,不是蛋白多糖。
(4)经红外光谱和高效液相色谱分析,可推断:其中POLⅠB与POLⅢ’多糖是为β-糖苷键型为主的多糖,POLⅡA多糖是α-糖苷键型;POLⅠB和POLⅢ’为吡喃多糖;POLⅡA组成中不含有二级-OH、β-吡喃糖苷键;三种组分中,只有POLⅢ’含有甘露糖成分。
将POLIⅢ’进行了水解,经HPLC分析表明其单糖确实为木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖这5种单糖,其摩尔量比值为0.72∶1.08∶0.53∶2.97∶2.75。
(5)对多糖的抗氧化性进行了测定,结果显示其粗多糖在低用量下就具有良好的抗氧化能力,并且,其抗氧化能力随着用量的增加,增强其抗氧化能力。
对多糖的抑菌情况进行了测定,显示其对8种食品常见菌有一定抑制作用,从粗多糖的抗菌活性大小来看,其活性还是相对较弱,非广谱抗菌。