背景与目的目前胃癌是最常见的消化系恶性肿瘤之一,在我国甚至全球范围内都有很高的发病率和死亡率[1]。而其中大约70%左右的胃癌发生在资源匮乏的发展中国家。由于胃癌的早期症状不明显,大多患者就诊时，肿瘤已处于进展期或晚期，治疗效果差。因此，早期筛查胃癌患者，不仅能提高胃癌的检出率，更降低了胃癌患者治疗上的难度。尽管人们早已针对胃癌的发生发展机制及其临床诊断、治疗开展了广泛的研究，但至今为止，胃癌的病因仍不十分清除，很多发面尚待更深一步的研究。所以，胃癌的早期诊断就显得尤为重要，现在人们逐渐意识到：肿瘤发生、发展是胃癌的发生发展是一个多种内外因素共同作用的一个结果，是多个环节、多种调控机理、多样要素彼此影响所引发的[2-5]。最近几年，因为发现RKIP能够对多条细胞信号传导通路起到极其重要的功能，尤其是最新研究证实RKIP可以抑制肿瘤细胞的迁徙以后[6]，RKIP的研究已经变为肿瘤研究工作范畴中的一个新的研究焦点。RKIP是一种高度保守的、普遍存在于人体的各个组织中并且有很多功能的23ku蛋白，人RKIP基因长约10000,定位在12q23.24，其mRNA长约1507bp，可以编码由187个氨基酸组成的蛋白，由RKIP基因的四个外显子转录而成，主要在组织的细胞膜上表达[7]。RKIP是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kniase，MAPK)信号转导通路的自然遏抑物，Yeung等[8]于20世纪初研究表明人PEBP可以和Raf-1连结在一块，从而将Raf-1/MEK/ERK信号转导通路阻遏，所以把PEBP命名为RKIP。RKIP不仅可以抑制Raf-1/MEK/ERK信号传导通路，而且还能够对G蛋白偶联受体信号通路以及核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB)信号通路进行关键性调节控制[9][10]。由于信号传导通路对细胞的增殖、分化以及凋亡等重要的细胞生理功能有着十分要紧的调控作用，绝大多数肿瘤都伴同着信号传导通路的异常,不难得出这个推论：RKIP与肿瘤的发生、发展和转移密切相关，与多种肿瘤的不良预后密切相关[11]。通过实验研究证明RKIP可以抑制恶性黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、肝癌等多种恶性肿瘤细胞的转移[12,13]。然而，RKIP在胃癌（GC）组织中的表达情况以及对转移的作用还没见报道，因此RKIP与胃癌发生发展的关系仍需要大量的科学研究去进一步探讨。本科研小组旨在研究RKIP与胃癌发生、发展的关系，以及RKIP表达水平改变对GC细胞体外侵袭能力的影响。材料与方法1.采集郑州大学第一附属医院胃肠外科自2011年12月至2013年2月手术切除的胃癌组织极其相对应的癌旁正常组织标。前及术后病理学证实为胃腺癌，均为首次手术，术前未接受过肿瘤相关性治疗，如放疗、化疗或者免疫治疗等且所有患者均知情同意签字为凭。2.采用含有10%胎牛血清，50μg/ml抗坏血酸钠，和100μg/ml青霉素G/100μg链霉素的达尔伯克改良培养基（DMEM）培养SGC-7901细胞，置于温度为37℃、二氧化氮浓度为5%CO2的细胞培养箱中，等细胞长满至80%分散度时，对细胞进行传代，每三天换一次细胞培养液，等细胞传至第5到6代时开始进行实验；把细胞接种于24孔和6孔的培养板中，用细胞计数器测定细胞密度，确保接种密度为5×103/cm2，然后置于培养箱中，让细胞过夜生长后第二天对细进行实验处理，处理后每三天换一次细胞处理液。3.应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术及蛋白质印迹法（Western Blot）分别检测胃癌组织及相应癌旁组织中RKIP mRNA以及蛋白的表达情况，并且采用脂质体转染方法将不同表达水平的RKIP分别转染SGC-7901细胞，并用Western blot检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究分析改变RKIP的表达水平对胃癌体外细胞侵袭能力的功效。4.对胃癌及癌旁RKIP的对比采用配对t检验。其余为定性资料，对比采用χ2检验及Fisher确切概率法检验，用SPSS17.0软件进行统计学处理，当P<0.05时差异有统计学意义。结果1. RT-PCR结果显示胃癌组织中RKIP mRNA的表达(0.12±0.02)显著低于癌旁正常组织(0.48±0.04)，行配对t检验，检验结果提示两组数据在统计学上有意义(t=6.562, P<0.01)，而且RKIP的表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移与否、肿瘤TNM分期及是否远传转移有关(P<0.05)而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关。2. Western bolt结果显示RKIP在癌组织中的表达量为(0.08±0.02)，在癌旁正常组织中的表达量为(0.41±0.04)，行配对t检验，检验结果提示两组数据在统计学上有意义(t=7.068, P<0.01)。3. Transwell细胞迁移实验结果显示：上调RKIP表达水平之后,SGC-7901细胞的侵袭能力降低，而下调RKIP表达水平后SGC-7901细胞的侵袭能力明显提高。结论1. RKIP mRNA以及蛋白在胃癌组织中表达缺失或者下调，并且RKIP的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小无关,但是与患者肿瘤的分化程度、淋巴结转移与否、肿瘤TNM分期及是否远传转移有关。RKIP的表达在胃癌的发生和发展起了重要作用，有可能成为胃癌新的生物诊断标志物。2.下调RKIP的表达水平可以明显提高SGC-7901细胞的侵袭能力，而上调RKIP的表达水平可以明显降低SGC-7901细胞的侵袭能力，RKIP可能对胃癌的生物学行为及预后提供了一定的判断性。