论文部分内容阅读
目的:研究亨廷顿蛋白(Huntingtin,Htt)氨基末端片段-- Htt-552在原代星形神经胶质细胞中表达后对其谷氨酸转运体表达水平及其功能的影响,进一步通过增强自噬以清除突变Htt后,观察谷氨酸转运体表达的变化,初步探讨自噬对突变Htt引起星形胶质细胞谷氨酸转运功能下降的影响。
方法:采用腺病毒介导野生型与突变型Htt-552片段转染的方法制作原代星形神经胶质细胞的亨廷顿舞蹈病模型。利用Western blotting法和Real-time PCR法检测原代星形神经胶质细胞模型中谷氨酸转运体GLT-1和GLAST的表达情况,同时采用液体闪烁仪检测该模型中星形胶质细胞的谷氨酸摄取情况。运用Western blotting法检测自噬激活剂rapamycin和自噬抑制剂3-MA对Htt-552片段在细胞中蓄积的影响,以及谷氨酸转运体GLT-1表达的变化,并用液体闪烁仪检测谷氨酸转运情况的变化。
结果:腺病毒成功介导野生型与突变型Htt-552片段在原代星形神经胶质细胞中表达后,谷氨酸转运体GLT-1在蛋白水平和mRNA水平均有明显下降,而GLAST却无明显变化;谷氨酸转运体GLT-1表达的下降导致了星形胶质细胞的谷氨酸摄取量明显下降。自噬激活剂rapamycin可以有效的清除突变Htt;突变Htt被清除后,谷氨酸转运体GLT-1的蛋白表达水平明显回升,星形胶质细胞的谷氨酸转运功能也得以恢复。
结论:突变型Htt-552片段能够降低谷氨酸转运体GLT-1的表达,从而影响了星形胶质细胞的谷氨酸转运功能。而激活自噬,有效清除突变htt后,谷氨酸转运体GLT-1的表达及星形胶质细胞的谷氨酸转运功能都可以恢复。
方法:采用腺病毒介导野生型与突变型Htt-552片段转染的方法制作原代星形神经胶质细胞的亨廷顿舞蹈病模型。利用Western blotting法和Real-time PCR法检测原代星形神经胶质细胞模型中谷氨酸转运体GLT-1和GLAST的表达情况,同时采用液体闪烁仪检测该模型中星形胶质细胞的谷氨酸摄取情况。运用Western blotting法检测自噬激活剂rapamycin和自噬抑制剂3-MA对Htt-552片段在细胞中蓄积的影响,以及谷氨酸转运体GLT-1表达的变化,并用液体闪烁仪检测谷氨酸转运情况的变化。
结果:腺病毒成功介导野生型与突变型Htt-552片段在原代星形神经胶质细胞中表达后,谷氨酸转运体GLT-1在蛋白水平和mRNA水平均有明显下降,而GLAST却无明显变化;谷氨酸转运体GLT-1表达的下降导致了星形胶质细胞的谷氨酸摄取量明显下降。自噬激活剂rapamycin可以有效的清除突变Htt;突变Htt被清除后,谷氨酸转运体GLT-1的蛋白表达水平明显回升,星形胶质细胞的谷氨酸转运功能也得以恢复。
结论:突变型Htt-552片段能够降低谷氨酸转运体GLT-1的表达,从而影响了星形胶质细胞的谷氨酸转运功能。而激活自噬,有效清除突变htt后,谷氨酸转运体GLT-1的表达及星形胶质细胞的谷氨酸转运功能都可以恢复。