猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是高度传染性疾病猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）的病原体。可导致孕猪繁殖失败、仔猪和育成猪发生呼吸道症状,引发持续感染和免疫抑制,致死率高,其变异性强,不断出现高致病毒株,给世界范围的养猪产业带来了重大经济损失。PRRSV属于动脉炎病毒科成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒。与DNA病毒必须进入细胞核进行基因组复制不同,RNA病毒需要将其基因组运送到细胞核周区域进行翻译和复制。然而宿主细胞质中充满了细胞骨架形成的蛋白纤维网及功能各异的细胞器,阻碍分子量大于500 k Da分子的自由扩散。若不利用宿主的细胞骨架及内膜转运系统,病毒很难通过凝胶状的细胞质到达特定的目的地。目前关于PRRSV的研究多集中于病毒的变异、免疫抑制和持续感染及病毒的入侵途径,而关于PRRSV在宿主细胞中如何到达核周区域及完成整个生活周期的分子机制,研究尚不充分。Rab蛋白家族属于小GTP酶中的最大家族,在真核生物的细胞膜转运系统中发挥着主要的调节作用。哺乳动物细胞中存在近70种Rab蛋白,不同种类的Rab蛋白受不同的上游因子调控,并作用于不同的效应因子,在膜泡形成、转运、粘附、锚定和融合中发挥重要作用,形成一个复杂的调节网络。目前研究报道Rab蛋白及其效应因子在一些病毒复制中发挥重要功能:博尔纳病毒的入侵需要早期内吞体中有功能的Rab5蛋白;Rab7被招募到早期内吞体中,从而介导simliki森林病毒从早期内吞体向晚期内吞体的转运;Rab11是循环内吞体中关键的GTP结合蛋白,对于呼吸道合胞体病毒、仙台病毒、安第斯病毒等的组装必不可少。故推测Rab蛋白极有可能在PRRSV的胞内运输、脱壳、组装释放过程起着重要作用。本研究以体外对PRRSV易感的猴胚胎肾上皮细胞Marc-145为模型,来探寻Rab蛋白在PRRSV入侵进入宿主细胞后发挥的功能。首先,通过NCBI数据库获得所有非洲绿猴源Rab基因,并基于此构建针对猴源Rab基因的sh RNA文库,涉及62种猴源Rab基因,共有187个克隆。然后,以p LKO.1为载体构建重组质粒,与p MD2.G和ps PAX2包装质粒共同转染HEK293T/17细胞获得慢病毒。再利用慢病毒感染Marc-145细胞,通过puromycin筛选及实时荧光定量PCR方法测定各细胞株中Rab基因的敲减效率,获得稳定且高效抑制猴源Rab基因表达的细胞株（sh Rab-Marc145）。用带有绿色荧光蛋白（GFP）标签的PRRSV毒株分别感染不同的sh Rab-Marc145,通过荧光显微镜观察及多功能酶标仪扫描感染细胞中的荧光强度,初步筛选出对PRRSV增殖有明显影响的Rab蛋白。结果表明,本研究成功构建了针对猴源Rab基因的sh RNA文库,并筛选获得了稳定转染的细胞株。实时荧光定量PCR结果显示,筛选获得的62种sh Rab-Marc145细胞株的Rab基因表达均受明显抑制。PRRSV-GFP感染sh Rab-Marc145试验显示:14种sh Rab-Marc145细胞株能明显抑制PRRSV-GFP的增殖,15种sh Rab-Marc145细胞株显示较弱的抑制作用;6种sh Rab-Marc145细胞株能明显促进PRRSV-GFP的增殖,7种sh Rab-Marc145细胞株显示较弱的促进增殖的作用;20种sh Rab-Marc145细胞株对PRRSV-GFP的增殖无明显的抑制或促进作用。上述研究结果表明,Rab蛋白家族在PRRSV增殖中发挥着重要作用。本研究为后续深入探索Rab蛋白在PRRSV生活周期中的具体功能以及研究PRRSV在宿主细胞中如何到达核周区域并完成其整个生活周期的分子机制提供了依据。