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背景与目的甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲状腺癌中最常见的类型。近年来我国PTC发病率明显上升,严重威胁人体健康。PTC侵袭能力较强且早期多无明显症状,因此很多患者就医时已经出现淋巴结转移或已侵犯周围器官和组织,而当PTC发生浸润或远处转移时,会严重影响患者的预后情况。为了提高PTC患者的生存率和生活质量,探索PTC有效的治疗靶点、寻找更安全有效的治疗途径一直是研究的热点。MicroRNAs(小分子RNA,miRNAs)是非编码单链RNA,其全长约为21-25个核苷酸,miRNAs可以靶向识别并降解特定的mRNA,参与各种细胞生物学活动。同时miRNAs还参与了机体的多种病理过程,在多种肿瘤的发生发展中都出现了 miRNAs的异常表达。近些年来,人们在PTC组织中也发现了多种miRNA的表达异常,其中以miR-146b-5p、miR-221 及 miR-222 变化最为明显。进一步检测发现 miR-146b-5p在PTC组织中的表达水平高于正常组织,且随着肿瘤分期的增加,其表达水平不断升高。因此认为miR-146b-5p与PTC的发生发展进程有密切关联。泛素特异性蛋白酶(ubiquitin specific protease,USPs)是去蛋白酶体超家族的重要成员。其包含USP22、USP33、USP10、USP2a等多种亚型,广泛存在于细胞内。USP可以选择性地降解或稳定癌基因、抑癌基因以及各种蛋白,在肿瘤发生发展的过程中起到重要作用。而根据最近的报道,USP33在PTC组织中表达降低,其可以抑制PTC的发展和转移。基于以往的研究,我们设想miR-146b-5p可能通过调控USP33从而促进PTC的增殖和迁移。而miR-146b-5p及USP33在PTC发生发展过程中的具体作用机制尚不明朗。因此,本研究基于基因过表达及敲除模型,对PTC发展进程中miR-146b-5p与USP33的关系以及miR-146b-5p与USP33对PTC的发展造成的影响进行了初步研究。方法1、收集65例于2018年4月至2018年12月期间在郑州大学第一附属医院甲状腺外科就诊患者的甲状腺乳头状癌组织及癌旁正常组织,并保存于液氮中。2、RT-PCR和Western blot检测癌旁正常组织与PTC组织中miR-146b-5p与USP33的表达水平,并分析PTC组织中miR-146b-5p和USP33的相关性。3、构建miR-146b-5p过表达载体和靶向沉默miR-146b-5p载体并建立稳定过表达和沉默miR-146b-5p的TPC-1细胞株。4、RT-PCR和Western blot检测miR-146b-5p稳定过表达或沉默的TPC-1细胞中miR-146b-5p和USP33及其mRNA的表达。5、通过CCK-8试剂盒法、transwell细胞侵袭实验等检测各组TPC-1细胞的细胞生物学行为。6、通过裸鼠成瘤实验和检测瘤组织中USP33的表达情况评估过表达和沉默miR-146b-5p在体内对USP33表达的影响。7、采用SPSS 25.0和Prism 8统计软件进行数据分析,使用t检验、Pearson相关性分析、Kruskal-Wallis H检验等统计方法,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1、miR-146b-5p在PTC组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),USP33在PTC组织中的表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05),PTC组织中miR-146b-5p的表达与USP33的表达呈负相关。2、成功构建miR-146b-5p过表达载体和靶向沉默miR-146b-5p载体并成功转染,建立了稳定过表达和沉默miR-146b-5p的TPC-1细胞株。3、稳定过表达miR-146b-5p的TPC-1细胞的生长速度和迁移能力比阴性对照组显著提高(P<0.05),沉默miR-146b-5p的TPC-1细胞的生长速度和迁移能力较阴性对照组显著降低(P<0.05)。4、在稳定过表达miR-146b-5p的TPC-1细胞中,miR-146b-5p的表达水平明显高于阴性对照的TPC-1细胞(P<0.05),USP33及其mRNA的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。在沉默miR-146b-5p的TPC-1细胞中,miR-146b-5p的表达水平明显低于阴性对照的TPC-1细胞(P<0.05)。USP33及其mRNA的表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05)。5、在稳定过表达miR-146b-5p的裸鼠肿瘤组织中,USP33的表达水平明显降低(P<0.05),在沉默miR-146b-5p的裸鼠肿瘤组织中,USP33的表达水平明显提高(P<0.05)。结论1、过表达miR-146b-5p的TPC-1细胞的增殖和迁移能力增强,沉默miR-146b-5p的TPC-1细胞的增殖和迁移能力减弱,即miR-146b-5p可以促进TPC-1细胞的增殖和迁移能力,可以促进甲状腺乳头状癌的发生发展。2、在甲状腺乳头状癌组织中,miR-146b-5p的过表达抑制了 USP33的表达,miR-146b-5p的沉默促进了 USP33的表达,miR-146b-5p对于USP33具有一定的调控作用。研究成果有机连接miR-146b-5p在甲状腺乳头状癌发展进程中的作用,有益于继续探索抑制甲状腺乳头状癌转移的靶点及关键分子,预测甲状腺乳头状癌转移的动态过程及其规律,进而寻求干预的靶点及关键分子。