【摘 要】
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为了大量获得Vasostatin蛋白,更好地研究其功能和作用,该实验在国内首次利用RT-PCR技术从人肝脏组织中获取人血管抑制因子的cDNA,将其克隆至pUC-T载体上,测序后将目的基因片
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为了大量获得Vasostatin蛋白,更好地研究其功能和作用,该实验在国内首次利用RT-PCR技术从人肝脏组织中获取人血管抑制因子的cDNA,将其克隆至pUC-T载体上,测序后将目的基因片段亚克隆至原核表达载体Pqe30中,转化M15大肠杆菌,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,为了高效表达Vasostatin蛋白,我们还探讨了不同温度、不同IPTG浓度、不同时相该蛋白的表达,并利用固定金属离子亲合层析法对表达产物进行纯化,肽指纹图谱分析对纯化后的蛋白进行鉴定.利用MTT法及<3>H- TdR法进行血管内皮细胞增殖抑制实验,对重组人Vasostatin蛋白进行体外的功能检测.流式细胞仪检测细胞周期验证重组人Vasostatin蛋白是否具有诱导细胞凋亡的机制.利用鸡胚绒毛尿囊膜实验及碱烧伤角膜新生血管的动物模型对重组人Vasostatin蛋白进行了体内抑制血管生成的活性研究.
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