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目的:探究三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞WNT信号通路抑制因子SFRPs(secreted frizzle related proteins)表达情况的影响;探究其对该基因的启动子区甲基化情况的影响,以进一步探明As2O3治疗APL可能存在的潜在表观遗传学调控机制。方法:1.予三氧化二砷作用于对数增长期的急性早幼粒细胞病细胞株NB4后,通过CCK-8检测As2O3对细胞增殖的影响,通过流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡及细胞周期的变化情况,并通过Western blot检测细胞相关凋亡蛋白的表达水平,初步探讨As2O3引起凋亡的分子机制;2.通过BSP技术,TA克隆测序检测对照组(未加药组)与加药组细胞SFRPs(SFRP1,SFRP2,SFRP4,SFRP5)启动子区Cp G岛甲基化变化情况,分析SFRPs启动子区甲基化和细胞凋亡相关性,探索As2O3治疗APL可能存在的表观遗传学改变;并通过Real Time-q PCR及Western blot检测相关DNMTs(DNA methyltransferases)表达水平,分析引起细胞表观遗传学改变的相关机制。3.通过Real Time-q PCR检测As2O3作用前后细胞WNT通路抑制因子(SFRP1,SFRP2,SFRP4,SFRP5)的表达情况变化,分析其与药物作用后细胞凋亡的相关性;通过Real Time-q PCR检测WNT通路关键分子beta-catenin及下游靶基因Survivin表达情况,进一步探索As2O3作用于急性早幼粒细胞白血病的相关分子机制。结果:1.三氧化二砷能够抑制NB4细胞的增殖,阻滞细胞周期,并促进细胞的凋亡,并具有浓度依赖性;As2O3能够促进凋亡相关蛋白的表达。2.通过检测发现未加药组NB4细胞SFRPs(SFRP1,SFRP2,SFRP4,SFRP5)启动子区均有不同程度的高甲基化,予As2O3处理后SFRP1/4启动子区甲基化率下降,与细胞凋亡呈负相关,SFRP2/5启动子区甲基化率下调不明显;对照组与加药组相比,DNMTs(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)蛋白表达量下降,并且DNMT1的下调与药物浓度呈负向相关。3.As2O3处理后,NB4细胞WNT通路拮抗因子SFRP1,SFRP4有明显的表达上调,SFRP2、SFRP5表达上调不明显,并且加药组与对照组相比,WNT信号通路下游关键基因的表达减少;SFRP1/4的上调表达与细胞凋亡率呈现正相关关系。结论:三氧化二砷能够抑制NB4细胞的增殖、促进凋亡,可能与逆转WNT信号通路SFRPs的甲基化,上调其蛋白表达,抑制WNT信号通路的过度激活有关,而砷剂的去甲基化作用可能与通过下调DNMTs的表达有关。砷剂治疗APL的分子机制复杂,除了能够靶向降解PML-RARα融合基因外,砷剂的表观遗传学调控作用也可能是其重要的分子机制之一。有关表观遗传学调控的靶向药物,有望成为治疗APL一个新的方向。