多杀菌素高产菌株的选育及其发酵工艺研究

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通过对多杀菌素产生菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora Spinosa)C121菌株进行分离复壮,获得一株遗传性能较稳定的菌株C121-11,以C121-11为出发菌株,制备原生质体,并进行紫外线诱变育种,获得比出发菌株C121-11效价(376μg/ml)提高35.64%的菌株PU131,以PU131为出发菌株,进行氮离子注入诱变,获得比PU131效价(510μg/ml)提高34.51%的菌株N229,以N229为出发菌株,进行了60Co-γ射线诱变,获得比N229效价(686μg/ml)提高23.91%的菌株Co329。菌株Co329的发酵效价(850μg/ml)比原出发菌株C121-11提高126.06%。传代试验表明PU131、N229和Co329三个菌株传代都比较稳定。 以Co329菌株为试验菌株进行发酵配方筛选,探索了不同碳源、不同氮源、无机盐以及微量元素等对多杀菌素生物合成的影响,经八因子十六水平的均匀设计以及正交设计的筛选试验,对培养基进行了优化。优选发酵配方为:葡萄糖5.6%、可溶性淀粉3.2%、豆油0.1%、棉籽饼粉2.0%、豆饼粉0.2%、玉米浆1.0%、酵母粉0.2%、CaCO30.5%、MgSO40.02%、NaC10.02%、ZnCl20.01%、pH7.0。 另外,进行了种龄、接种量、摇瓶装量、pH、摇床转速以及温度等培养条件的优化试验,筛选出适合Co329菌株产素的最佳发酵条件如下:种龄2d、接种量10%、50ml/500ml、摇床转速210r/min。采用以上优化后的配方及条件进行摇瓶发酵,最终的发酵效价最高达到900μg/ml,比原配方提高了15.09%。
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