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嗜酸微生物是极端环境微生物的重要类群,在酸性环境中发挥着重要的生态作用,对人们的生活生产具有潜在的生物技术价值。
本研究从新疆某矿区铀矿酸性废水分离出一株真菌。依据ITS序列并结合形态特征分析,该菌株初步鉴定为Penidiella sp.,暂命名为Penidiella sp.HEY-1。该菌株的最适生长pn值为3.0~4.0,在pH值2.0也能较好生长,具有嗜酸性。以麸皮和豆渣为基质进行发酵产酶研究,该菌株能分泌产生木聚糖酶、淀粉酶、果胶酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶以及β-葡萄糖苷酶等糖苷水解酶。是一株具有应用潜力的工业用酶产生菌。
初步建立了能诱导菌株Penidiella sp.HEY-1同时产生上述六种酶的发酵方法。通过优化培养基中麸皮和豆渣的组成比例、培养的pn值和温度,建立了4种培养方法。方法1:只添加麸皮,pn值2.0,培养温度20℃,高产木聚糖酶。方法2:麸皮与豆渣比例为1:1,pn值2.5,培养温度25℃,高产淀粉酶、果胶酶。方法3:麸皮与豆渣比例为1:1,pH值4.0,培养温度30℃,高产α半乳糖苷酶。方法4:只添加豆渣,pH值3.0,培养温度30℃,高产β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。
采用乙醇沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析与Sephadex G-100凝胶过滤层析等步骤后获得了凝胶电泳均一的α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,它们的相对分子质量分别为52.5 kDa、65.5 kDa,比活分别为15.83 U/mg和3.30U/mg、纯化倍数分别为15.05和4.52、回收率分别为14.6%和2.2%。
α-半乳糖苷酶反应的最适温度为60℃,最适pn值为3.0,在60℃以下及pH值2.0~6.0范围内能保持稳定。Ba2+、Fe2+、Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+和K+对酶活有明显的激活作用,Mn2+和Fe3+对酶活性有极强的抑制作用,Hg+和Na+几乎完全抑制了酶活性。该酶可作用对-硝基苯-α-D-半乳糖苷(pNPGal)、棉籽糖和水苏糖,该酶作用于pNPGal的米氏常数(Km)值为0.768 mmol/L,酶促反应的最大速度(Vmax)为1.55×10-3 mol/(L·min)。
β-葡萄糖苷酶反应的最适温度为60~70℃,最适pH值为3.0,在70℃以下及pH值2.0~8.0范围内均能保持稳定。Mn2+对酶有激活作用,K+、Fe3+微弱的激活作用,而Na+对酶有明显的抑制作用,其他金属离子对酶的活性影响不大。该酶作用于对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPGlu)、邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(oNPG)的米氏常数(Km)值分别为0.434 mmol/L和0.411mmol/L,酶促反应的最大速度(Vmax)分别为1.0×10-3和3.3×10-4 mol/(L·min)。
研究表明α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶均具有嗜酸性,可以应用于饲料、食品和医学等领域。