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目的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染在全世界流行,在非洲和亚洲地区感染流行率最高。最新流行病学调查显示有20亿人曾感染HBV,其中2.4亿人为慢性HBV感染者,每年约有65万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)。乙型肝炎病毒的慢性感染是病毒复制和受损的宿主免疫力相互作用的结果。由于乙型肝炎病毒感染者固有免疫和适应性免疫系统受损,不能有效地对病毒产生效应,导致持续性的慢性病毒感染。固有免疫在HBV急性感染期发挥瞬时作用,并诱导后续的特异性免疫应答。自然杀伤细胞(nature killer cells,NK Cells)是固有免疫清除细胞内病原体和异常细胞的重要病毒应答细胞,它主要通过分泌细胞因子和杀伤功能发挥作用。杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1(Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1,KLRG1)首先发现于大鼠粘膜型肥大细胞株RBL-2H3上,被认为是一种抑制炎症介质释放的受体。在人体中KLRG1受体主要在NK细胞和T细胞上表达。有文献报道在丙肝病人外周血NK细胞上的KLRG1受体表达会促进NK细胞数量减少和功能受损,其机制主要是抑制NK细胞的增殖、促进NK细胞的凋亡和减少NK细胞炎症细胞因子的释放。本研究旨在探求在慢性乙型肝炎病毒感染中KLRG1受体的表达对NK细胞功能的影响。方法1.从120名慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康人外周血中提取单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)使用流式细胞仪检测NK细胞在淋巴细胞中的比例和KLRG1~+NK细胞比例;2.在体外用丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)和离子霉素刺激HBV感染者和健康对照的PBMC,分别检测外周血PBMC中表达IFN-γ的NK细胞频数。3.分析外周血PBMC中NK细胞上KLRG1表达与IFN-γ分泌量的相关性。结果1.外周血中NK细胞频数检测:通过流式细胞仪检测慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康对照组(19例)外周血淋巴细胞中NK细胞的比例,分析结果表明HBV感染组NK细胞频数(16.92±7.9%)与健康对照组(10.57±6.5%)没有明显差异(P=0.3297)。2.外周血中KLRG1+NK细胞频数的分析:通过流式细胞仪检测慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康对照组(19例)外周血PBMC中KLRG1+NK细胞的比例,发现HBV感染组KLRG1~+NK细胞比例(49.43±21.2%)明显高于健康对照组(31.60±17.9%),两组差异具有统计学意义(P<0.001);3.外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK细胞频数分析:检测慢性乙型肝炎病毒感染者(28例)与健康对照组(12例)外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK细胞频数,发现HBV感染组外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK细胞频数明显少于健康对照组(t=4.801,P<0.0001)。进一步分析发现对照组中分泌IFN-γ的NK细胞频数,KLRG1~+NK细胞明显少于KLRG1~-NK细胞(t=8.586,P<0.0001);在HBV感染组中分泌IFN-γ的NK细胞频数,KLRG1~+NK细胞也明显少于KLRG1~-NK细胞(t=4.801,P<0.0001)。与对照组比较,HBV感染组中分泌IFN-γ的KLRG1~+NK细胞频数、KLRG1~-NK细胞频数均明显降低(t=2.753,P=0.009;t=6.391,P<0.0001)。4.HBV感染者外周血PBMC中NK细胞上KLRG1表达与IFN-γ分泌量的相关性分析:为了进一步阐明NK细胞上KLRG1表达与IFN-γ分泌量之间的关系,用GraphPad Prism 6.03软件分析了两组变量的相关性,结果显示感染者外周血PBMC中NK细胞上KLRG1表达与IFN-γ分泌量呈现明显的负相关关系(相关系数=-0.5470,P=0.0026)。结论乙型肝炎病毒感染可增加NK细胞KLRG1的表达,并且进一步减少NK细胞中IFN-γ分泌,可能是造成HBV慢性感染的要素。