糖尿病已成为严重危害人类健康的重大疾病之一，到目前为止，胰岛移植仍然是治愈1型糖尿病和部分2型糖尿病患者最有效的方法。但供体不足及免疫排斥反应严重阻碍胰岛移植的推广应用。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是一类具有自我增殖和多向分化潜能的成体干细胞。在适当的诱导条件下，可以跨胚层分化为内胚层的胰岛细胞。然而如何高效而定向的诱导分化仍然是一个大的挑战。胰岛细胞分化的机制是由一系列胰腺发育过程的转录因子调控完成的。DNA甲基化水平参与组织特异性基因的调控，从而参与干细胞分化。本试验在优化分离培养兔BMSCs方法的基础上，研究甲基化抑制剂5-aza-dC对兔BMSCs向胰岛细胞分化的作用和适宜浓度，探讨DNA甲基化水平与胰岛细胞分化的关系，为进一步研究和临床应用提供理论依据。1.本试验采用红细胞裂解法分离兔BMSCs，利用全骨髓法的原理对BMSCs进行培养，优化传代条件和接种密度，免疫细胞化学法鉴定BMSCs表面标志，细胞计数法测定第3代和第8代兔BMSCs生长曲线并计算群体倍增时间，得出采用上述方法分离培养兔BMSCs，能够得到细胞纯度高，活力强的BMSCs。2.本试验采用MTT法检测甲基化抑制剂5-aza-dC对兔BMSCs细胞活力的影响，筛选出作用兔BMSCs适宜的5-aza-dC浓度为0.2-1μmol/L。采用5-aza-dC（1μmol/L，96h）对兔BMSCs进行诱导前期处理，与未添加5-aza-dC的诱导组进行形态学对比、双硫腙染色鉴定胰岛素分泌对比、免疫荧光鉴定PDX-1蛋白表达对比。结果表明应用甲基化抑制剂5-aza-dC联合DMSO、尼克酰胺、高糖诱导后的BMSCs具备分泌胰岛素的能力、并表达胰岛细胞的特异标志，表明甲基化抑制剂5-aza-dC能够促进胰岛细胞的分化和成熟。3.本试验在试验二的基础上对应用甲基化抑制剂5-aza-dC处理的诱导后胰岛细胞，通过提取RNA,然后反转录成cDNA,对调控胰岛细胞分化与成熟的一个重要调控因子PDX-1进行检测，利用设计的引物进行扩增，通过凝胶电泳，紫外投射仪下观察结果并用凝胶成像系统摄像，成功检测到PDX-1基因。结论：甲基化抑制剂5-aza-dC联合DMSO、尼克酰胺、高糖能够诱导兔BMSCs分化为分泌胰岛素的胰岛细胞，DNA甲基化水平参与调控胰岛细胞分化，低甲基化促进胰岛特异基因表达，并进一步促进胰岛细胞的分化和β细胞的成熟。