选题依据:黄芪,是山西入选国家道地药材库的8味道地药材之一,用药量巨大,素有“十方八芪”之说。目前市场上,黄芪可以分为传统黄芪(仿野生种植)和移栽黄芪(育苗移栽种植)。屠鹏飞等人按照目前黄芪质量评价标准对不同等级规格的黄芪进行分析,得出的结论是移栽芪的品质不亚于传统芪。然而国际市场和国内的一些老中医并不认可移栽芪。这些矛盾说明目前的质量评价指标不能够全面准确的反映黄芪品质。因此需要建立更加合理的评价指标。多糖类是黄芪发挥免疫调节活性的主要物质,同时也是黄芪中含量最丰富的化合物。但由于目前苯酚-硫酸法测总多糖含量的方法缺乏专属性特征,不能全面反映多糖的特征。近年来发展出现的新技术--糖谱技术是基于糖类化合物的水解而发展形成具有专属性特征的指纹图谱技术,可用于多糖的定性、定量分析,还可用于药材的鉴别和质量评价。目的:通过构建黄芪多糖糖谱,筛选出可以鉴别不同种质资源黄芪的差异性糖片段,并对差异性糖片段进行结构解析与活性评价,最终建立该活性糖片段的含量测定方法用于不同种质资源黄芪的评价。研究方法与研究内容:对不同种质资源的黄芪多糖进行部分酸水解,通过PACE、HPTLC对黄芪多糖部分酸水解产物进行分析获得系列糖指纹图谱。通过数据分析,筛选出黄芪差异性糖片段。然后通过采用GC-MS、IR、NMR等技术对黄芪差异性糖片段进行结构表征。并通过比对已有文献报道的具有活性的植物多糖,获得黄芪专属性糖片段。通过分析黄芪专属性糖片段的体外抗氧化能力及免疫活性获得黄芪专属性活性糖片段,并建立该活性糖片段的含量测定方法用于不同种质资源黄芪的评价。此外还对黄芪多糖进行酶解和人工胃液水解构建黄芪多糖糖谱用于不同种质资源黄芪的鉴别。研究结果:1、基于部分酸水解的黄芪细胞可溶性多糖及糖缀合物指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪的评价,实验结果表明,分子量范围在540-900 Da之间的糖片段是区分黄芪栽培方式的主要差异性片段,而分子量范围在360-720 Da之间的糖片段是区分黄芪种属的主要差异性片段。结构分析表明差异性片段主要由葡萄糖和甘露糖及木糖组成,黄芪差异性糖片段ASP-1的可能结构为→2,3,6)-D-Glcp-(1→、D-Xylp-(1→及→4)-D-Manp-(1→。其中Glc和Man构成主链,主链构型为β型。通过对比已有文献报道最终确认黄芪差异性糖片段ASP-1为黄芪专属性糖片段。对黄芪专属性片段进行活性分析结果表明具有较低的体外抗氧化活性,但可以诱导产生炎症反应,具有免疫调节作用。最终通过实验研究筛选出黄芪专属性活性糖片段。建立了专属性活性片段含量测定方法,通过对24批黄芪样本分析发现,传统黄芪中DP3>3.0mg/m L,DP4>3.2 mg/mL,而移栽黄芪中DP3<3.0 mg/mL,DP4<3.2 mg/mL。2、基于酶水解的黄芪细胞可溶性多糖及糖缀合物指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪的鉴别:以12种糖苷水解酶对不同种质资源的黄芪多糖进行酶解,获得系列PACE指纹图谱,数据分析结果发现每种酶水解黄芪多糖都可以产生一系列的糖片段,分子范围在540-1100 Da是区分黄芪栽培方式的主要差异性片段。而分子量范围在700-900 Da是区分黄芪种属的主要差异性片段。3、基于人工胃液水解的黄芪细胞可溶性多糖及糖缀合物指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪的鉴别:模拟人工胃液条件处理不同种质资源的黄芪多糖,获得系列PACE糖指纹图谱,数据分析结果表明分子范围在900-1100 Da是区分黄芪栽培方式的主要差异性片段。而分子量范围在700-900 Da是区分黄芪种属的主要差异性片段。结论:糖谱技术是一种简单、方便、快捷的分析技术。通过对糖指纹图谱数据进行分析获得了黄芪差异性糖片段。实现不同种质源黄芪种质资源的鉴别与评价。该研究结果为阐明黄芪药材种质资源多糖的化学特征,完善黄芪质量评价标准,为保护和发展优质道地黄芪资源奠定了基础,也为多糖来源植物药材的种质资源客观评价探索了新途径。