【摘 要】
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目的:雌激素效应环指蛋白（Estrogen responsive finger protein,Efp,也称作tripartite motif protein 25,TRIM25）是重要的泛素E3连接酶,本实验室前期工作已证实Efp能够与14-3-3η发生相互作用,通过介导后者的泛素化降解影响其细胞内表达水平及其参与的心肌保护作用。同时,Efp作为雌激素受体（Estrogen receptor,E
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目的:雌激素效应环指蛋白（Estrogen responsive finger protein,Efp,也称作tripartite motif protein 25,TRIM25）是重要的泛素E3连接酶,本实验室前期工作已证实Efp能够与14-3-3η发生相互作用,通过介导后者的泛素化降解影响其细胞内表达水平及其参与的心肌保护作用。同时,Efp作为雌激素受体（Estrogen receptor,ER）的作用靶点之一,与雌激素功能亦存在相关性。本实验旨在探究Efp蛋白表达水平对17-β-雌二醇抗心肌缺氧复氧损伤保护作用的影响及其与14-3-3η的关系。方法:（1）采用H9c2心肌样细胞,构建缺氧复氧损伤模型;17-β-雌二醇预处理构建雌激素保护模型;分别以AD-Efp或AD-Efp-RNAi重组腺病毒载体上调或下调H9c2心肌样细胞中Efp蛋白,Western Blotting检测Efp、14-3-3η蛋白表达水平,以判断17-β-雌二醇对14-3-3η蛋白表达水平的影响。（2）H9c2心肌样细胞经培养后随机分为两个大组,第一大组:正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（A/R）、17-β-雌二醇+缺氧/复氧组（E2+A/R）、17-β-雌二醇+AD-Efp+缺氧/复氧组（E2+AD-Efp+A/R）、AD-Efp+A/R组（AD-Efp+A/R）、AD-Efp-NC+A/R组（AD-Efp-NC+A/R）;第二大组:正常对照组（Control）、缺氧/复氧组（A/R）、17-β-雌二醇+缺氧/复氧组（E2+A/R）、17-β-雌二醇+AD-Efp-RNAi+缺氧/复氧组（E2+AD-Efp-RNAi+A/R）、AD-Efp-RNAi+A/R组（AD-Efp-RNAi+A/R）、AD-Efp-RNAi-NC+A/R组（AD-Efp-RNAi-NC+A/R）。（3）MTS法检测细胞存活率;分光光度法检测LDH、SOD活性、线粒体通透性转换孔（mptp）开放程度;流式细胞仪检测细胞活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位变化（Δψm）及mptp开放程度,以评价不同处理组细胞的抗心肌缺氧复氧损伤保护作用的效应强弱。结果:（1）与A/R组比较,E2+A/R预处理组细胞存活率显著上升,LDH活性显著下降,SOD活性显著上升,ROS生成明显减少,线粒体膜电位（Δψm）显著升高,以及线粒体通透性转换孔的开放减少,差异均有统计学意义（P<0.01）。（2）与E2+A/R比较,E2+AD-Efp+A/R组细胞存活率显著下降,LDH活性显著上升,SOD活性显著下降,ROS生成明显增加,线粒体膜电位（Δψm）显著下降,线粒体通透性转换孔的开放增加;与E2+AD-Efp+A/R比较,AD-Efp+A/R组细胞存活率显著下降,LDH活性显著上升,SOD活性显著下降,ROS生成明显增加,线粒体膜电位（Δψm）显著下降,线粒体通透性转换孔的开放增加。差异均具有统计学意义（P<0.05）。（3）与E2+A/R比较,E2+AD-Efp-RNAi+A/R组细胞存活率显著上升,LDH活性显著下降,SOD活性显著上升,ROS生成明显减少,线粒体膜电位（Δψm）显著上升,线粒体通透性转换孔的开放减少,差异均具有统计学意义（P<0.05）。与E2+AD-Efp-RNAi+A/R比较,AD-Efp-RNAi+A/R组细胞存活率显著下降,LDH活性显著上升,SOD活性显著下降,ROS生成明显增多,线粒体膜电位（Δψm）显著下降,线粒体通透性转换孔的开放增加。差异均具有统计学意义（P<0.05）。（4）与E2+A/R组比较,E2+AD-Efp+A/R组14-3-3η蛋白明显下调,而与E2+AD-Efp+A/R比较,AD-Efp+A/R组14-3-3η蛋白呈上调趋势;与E2+A/R组比较,E2+AD-Efp-RNAi+A/R组14-3-3η蛋白上调,而与E2+AD-Efp-RNAi+A/R比较,AD-Efp-RNAi+A/R组14-3-3η蛋白呈上调趋势,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:在H9c2心肌样细胞中,Efp蛋白表达水平影响17-β-雌二醇抗心肌缺氧复氧损伤保护作用,其机制可能与14-3-3η有关。
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