皮肤组织特异表达β-catenin转基因小鼠和转基因绵羊的研究

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β-catenin是一个多功能分子,主要参与细胞间的黏附连接和Wnt通路的信号传递。研究表明β-catenin在毛囊的形态发生和毛囊干细胞分化过程中发挥重要作用。β-catenin表达异常会使胚胎期毛囊形成受阻及出生后个体毛发生长周期停止。为了进一步研究β-catenin调控毛囊发育的机理以及为细毛羊的品种改良提供一个理论依据,本研究克隆得到绵羊β-catenin基因序列,分别建立了表达绵羊β-catenin基因的转基因小鼠模型和过表达β-catenin的转基因绵羊模型。首先,根据不同物种间β-catenin基因同源性比对,本研究首次克隆得到绵羊的β-catenin基因全长cDNA序列,同时对β-catenin蛋白的各级结构分别进行预测。本研究对绵羊各个组织进行mRNA表达谱的分析,结果表明,心、肝、脾、肺、肾、皮肤、肌肉和脂肪组织中均检测到β-catenin基因的表达,其中,在肺和皮肤组织中的表达水平最高,在肌肉组织中的表达最低,差异极显著(P<0.01)。通过western blot研究分析表明,β-catenin蛋白在脂肪和皮肤组织中的表达量最低,在脾中的表达量最高,差异极显著(P<0.01)。本研究克隆得到皮肤特异性表达启动子K14,构建了皮肤特异的融合表达载体K14-β-catenin-IRES-EGFP,通过原核注射方法得到10只原代β-catenin转基因小鼠(F0代)。通过对F1代小鼠进行定量表达分析,我们共得到5个皮肤特异表达的转基因小鼠家系,其中59号家系小鼠的β-catenin基因在皮肤组织特异性高表达。活体成像系统检测到59号家系小鼠皮肤组织中有绿色荧光蛋白表达。将构建的载体线性化处理,双酶切保留启动子和外源基因片段后,通过原核注射的方法制备转基因绵羊。对19只供体进行超排处理,共获得胚胎193枚,其中可用胚胎158枚。将胚胎移植到64只受体,共获得38只妊娠羊,产羔62只,存活51只。经羔羊耳组织基因组PCR检测鉴定,共9只阳性羔羊。羊毛品质测定表明B025个体羊毛长度最长,与6月龄相比,12月龄羊毛直径有变小的趋势。B025可以作为优秀的种源进行进一步的传代测试。
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