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研究背景肺癌已成为全世界发病率最高的恶性肿瘤,非小细胞肺癌是肺癌中最常见病理类型,表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)突变是常见发病机制,临床常使用表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂(Epidermal Growth Factor Receptor-Tyrosinase Kinase Inhibitors,EGFR-TKI)靶向治疗。运用EGFR-TKI靶向药治疗EGFR突变肺癌患者,其总有效率达95%以上,总中位生存期达37个月以上,第一代EGFR-TKI靶向药吉非替尼目前已纳入国家医保,仍是临床一线用药。临床发现,在EGFR-TKI靶向药治疗肺癌过程中,常见不良反应以皮疹发病率为最高,其中以中至重度皮疹为主,严重者可影响患者生活质量,甚者中断靶向药治疗,目前西医对于靶向药所致皮疹治疗方法有限。EGFR-TKI导致皮疹不良反应主要影响皮肤角质形成细胞增殖及分化,导致皮肤角质层破坏,皮肤脱屑干燥,皮肤水分丢失,皮肤屏障功能障碍,引发皮肤炎性反应,并招募大量炎症因子及趋化因子等。因此,找到既不影响EGFR-TKI抗肿瘤效果,又可以改善副作用(如皮疹)的干预策略,是提高患者生活质量、保障治疗顺利实施的关键。验方“芪银三两三”配伍严谨,用药精当,主要治则为“益气和血、清热解毒”。通过对EGFR-TKI类靶向药相关皮疹观察发现,患者皮肤干燥瘙痒,甚至皲裂,并多伴有乏力、气短、心烦等,舌象多为色暗红、少苔,脉多沉细,病机以气虚毒聚、血燥热结为主,提出“益气和血、清热解毒”新治则新治法。通过前期临床病例收集已证实,“芪银三两三”可显著改善EGFR-TKI类靶向药相关皮疹。届于“芪银三两三”临床良好抗EGFR-TKI类靶向药相关皮疹的作用,为进一步研究其抗皮疹机制,特开展基础实验研究。研究目的通过对比临床患者皮疹发生表型及机制,充分评价并成功建立由靶向药吉非替尼诱导皮疹动物模型。通过验方“芪银三两三”对皮疹模型大鼠进行干预,确定验方疗效;并探究验方改善皮疹的分子机制。研究方法本研究共分为五个实验:实验一:吉非替尼诱导皮疹动物模型的建立。结合临床患者皮疹表现,包括皮疹出现时间及表型、血液中相关炎性细胞数量及肝功能变化、皮肤炎性细胞及炎性因子发生机制,对模型大鼠皮疹进行充分评价,最终成功建立由吉非替尼诱导皮疹动物模型。实验二:验方“芪银三两三”对模型大鼠整体状态,包括体重、食量及肝功能影响。验方对模型大鼠进行干预,对各组大鼠体重、食量进行监测,血液肝功能相关生化指标进行综合分析。实验三:验方“芪银三两三”对模型大鼠皮肤角质形成细胞凋亡的实验研究。验方对模型大鼠进行干预,通过皮肤HE染色,对皮肤角质形成细胞的细胞形态及皮肤表皮层厚度进行定量分析;皮肤免疫组化,检测皮肤角质形成细胞凋亡情况。实验四:验方“芪银三两三”对模型大鼠皮肤屏障功能及皮肤炎性状态改善的实验研究。验方对模型大鼠进行干预,对大鼠血液中相关炎性细胞数量、大鼠皮肤瘙痒行为学评分、皮肤炎性状态评分、皮肤水分丢失情况,并定量分析,最终确定复方对皮肤屏障功能及皮肤炎性状态的改善作用。实验五:验方“芪银三两三”治疗模型大鼠皮疹的分子机制研究。验方对模型大鼠进行干预,通过免疫组化、流式细胞技术,对模型大鼠皮肤中特异性炎性细胞进行定量分析;通过皮肤蛋白芯片,对大鼠皮肤中67种炎性因子表达情况及相关信号通路进行分析,筛查出关系最为密切的炎性蛋白及炎性信号通路,并进一步进行验证。实验结果实验一:成功建立了由吉非替尼诱导皮疹的动物模型。通过对BN大鼠皮疹及瘙痒出现时间、角质形成细胞增殖及凋亡情况、皮肤屏障功能障碍、皮肤相关炎性因子浸润及表达进行统计分析,与临床患者皮疹表型及发生机制进行综合评价,最终成功建立由吉非替尼诱导的皮疹动物模型。实验二:验方“芪银三两三”可改善模型大鼠体重及食量,不影响大鼠肝功能,并具有剂量依赖性。实验三:验方“芪银三两三”可改善模型大鼠皮肤角质形成细胞损伤。通过皮肤HE染色发现,验方能较好改善皮肤角质形成细胞增生障碍。通过皮肤免疫组化发现,验方可改善模型大鼠皮肤角质形成细胞过度凋亡,并具有剂量依赖性。实验四:验方“芪银三两三”可改善模型大鼠皮肤屏障功能及皮肤炎性状态。通过血液常规分析,验方可改善大鼠血液中炎性细胞数量,主要包括单核细胞及白细胞;通过对大鼠皮肤炎性状态、皮肤瘙痒行为学评分、皮肤水分丢失进行定量分析发现,验方能可改善模型大鼠皮肤的炎性症状及改善大鼠皮肤屏障功能,并具有剂量依赖性。实验五:验方“芪银三两三”可减少大鼠皮肤中巨噬细胞浸润及与巨噬细胞分泌密切相关的炎性因子,包括:CINC-3、TREM-1、CINC-2,主要通过IL-17信号通路介导调节。通过皮肤免疫组化、流式细胞技术,对大鼠皮肤中特异性炎性细胞进行定量分析发现,验方可减少大鼠皮肤中巨噬细胞浸润。通过蛋白芯片检测皮肤中67种炎性因子发现,验方主要减少与巨噬细胞分泌最为密切的3个炎性因子,包括:CINC-3、TREM-1、CINC-2;通过对相关炎性信号通路进行筛查发现,IL-17信号通路是发挥抗炎作用关系最为密切信号通路,并通过皮肤免疫组化进一步进行验证。结论实验成功建立由吉非替尼诱导的皮疹动物模型。验方“芪银三两三”通过减少角质形成细胞的过度凋亡及增殖障碍,改善皮肤屏障功能,减少血液中炎性细胞数量,减少皮肤中炎性巨噬细胞浸润及巨噬细胞分泌的细胞因子:CINC-3、TREM-1、CINC-2,最终达到改善模型大鼠皮疹的作用,其机制最主要通过IL-17信号通路进行介导调节。