生长抑素(somatostatin,SMS)作用原理是与生长激素发生协同或拮抗作用,将动物生长控制在种属特有的水平。将SMS基因与真核表达载体重组,构建的基因疫苗可以使动物体内产生SMS抗体,降低体内的SMS,进而解除它对生长激素的抑制作用,使生长激素分泌增加而提高动物的生长速度。为了得到具有较高表达量的含6×His-Tag重组蛋白质,本实验以大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)为分子内佐剂,以增强生长抑素的免疫原性,与生长抑素的基因共同构成重组质粒,再将外援基因诱导表达产生融合蛋白,从而为生长抑素基因工程疫苗的研究开发奠定基础。利用抗生长抑素(SMS)抗体可促进动物生长,但是由于安全性与效力问题,迄今尚未有SMS疫苗上市。将设计合成的生长基因片段为目标蛋白,通过基因工程的方法,构建了 pET28a系统的重组质粒,并将其转化至大肠杆菌DH5α中,通过筛选,选出正确的阳性转化子。经琼脂糖凝胶电泳鉴定,LTB基因的分子量为350 bp左右,合成的生长抑素基因的分子量在100 bp左右。将LTB基因和生长抑素基因融合后,再将得到的融合基因和载体质粒pET28a连接,并且转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,进行重组蛋白的诱导表达。将转化成功的受体表达菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,在诱导条件为温度37℃,诱导时间为4h,其IPTG的终浓度为1mmol/L时,能够得到较高的表达量。经SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳的鉴定,其目标融合蛋白在大肠杆菌内的表达主要是以包涵体的形式存在。本实验设计的表达融合蛋白自身带有6×His-Tag,可以通过6×His-Tag镍柱纯化系统对表达的重组蛋白进行分离、柱上复性及纯化。收集包涵体后,使用8mol/L尿素溶解,洗脱时咪唑的用量是500 mmol/L,柱上复性是在4℃下依次以7 mol/L-6 mol/L-5 mol/L-4 mol/L-3 mol/L-2 mol/L-1 mol/L-0 mol/L的包涵体洗涤液复性。含有上样前的重组蛋白质样品浓度分别为0.75 mg/mL、0.87 mg/mL、0.79 mg/mL,经过柱上复性纯化后的蛋白质浓度分别为1.36 mg/mL、1.22 mg/mL、1.12 mg/mL。经SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳的鉴定纯化后的重组蛋白质样品为单一的条带。LTB-SMS纯化鉴定后在家兔体内进行了皮下和粘膜免疫研究。研究结果表明,LTB-SMS的血清抗体滴度达到较高水平,说明LTB可有效地增强SMS的免疫原性。本实验可以为以后的疫苗的构建和制备提供有力的帮助,此融合蛋白有望进一步开发为生长抑素基因工程疫苗。