论文部分内容阅读
第一部分NNAV对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用目的：研究中华眼镜蛇蛇毒(Naja naja atra venom, NNAV)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)所致的小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法：将KM小鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为(n=10)生理盐水对照组、中华眼镜蛇蛇毒小剂量组（30μg/kg）、中剂量组（90μg/kg）、大剂量组（270μg/kg）。实验组以灌胃给药的方式预给药四天，分别给予不同剂量蛇毒溶液0.2ml/10g体重，第五天腹腔注射LPS(5mg/kg，0.1ml/10g)诱导急性肺损伤模型，对照组小鼠给予同体积生理盐水，6小时后取材称量肺重，计算肺系数，检测血清中TNF-α和IL-1β的含量，Western blot检测肺组织内IκB-α的表达，免疫组化实验检测NF-κB的核转位情况，HE染色观察肺损伤程度。结果：急性肺损伤模型小鼠肺系数和血清中的IL-1β和TNF-α的含量较正常对照组显著增加（P<0.05或P<0.01），NNAV给药组肺系数和血清中IL-1β和TNF-α的含量较模型组显著减少（P<0.05或P<0.01）。LPS模型组小鼠肺组织水肿明显，主要病变为弥漫性肺水肿、炎症、出血，间质增宽伴有大量炎细胞浸润，肺泡结构紊乱。NNAV各剂量组小鼠肺泡间隔增宽较模型组明显减轻，肺泡炎明显减轻，肺泡结构有明显改善。NF-κB在肺组织内核转位明显升高，IκB-α含量则明显下调，而给予NNAV的组别可以显著抑制NF-κB核转位并抑制IκB-α的下降。结论：中华眼镜蛇蛇毒能够对抗脂多糖LPS诱导的急性肺损伤，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化,减少细胞因子、炎症介质（TNF-a、IL-1β）的合成与释放而起到抗炎作用的。第二部分NNAV对博莱霉素和LPS诱导的肺纤维化的保护作用目的：研究NNAV对博来霉素（Bleomycin，BLM）诱导的肺纤维化模型和反复给予脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的肺纤维化小鼠的保护作用。方法：将雄性KM小鼠90只随机分为两批，每批随机分为(n=9)生理盐水对照组、中华眼镜蛇蛇毒小剂量组（30μg/kg）、中剂量组（90μg/kg）、大剂量组（270μg/kg）。实验组以灌胃给药的方式预给药四天，分别给予不同剂量蛇毒溶液0.2ml/10g体重。第五天建立肺纤维化模型，模型1：第五天向小鼠气管内缓慢注射博莱霉素5mg/kg诱导肺纤维化模型，正常对照组注入等体积的生理盐水。模型2：第五天除对照组小鼠外，均腹腔注射LPS (5mg/kg，0.1ml/10g)，对照组小鼠给予同体积生理盐水，之后每周一次腹腔注射LPS反复诱导肺纤维化模型。治疗组NNAV每天灌胃给药一次，剂量同上，对照组和模型组给予等体积生理盐水，记录体重变化，8周后，取材称取肺重，检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量，HE染色观察肺损伤程度。结果：BLM模型组和LPS模型组小鼠体重增加较正常组明显减少，肺系数和HYP含量明显增加（P<0.05或P<0.01），与各自模型组相比，NNAV给药组小鼠体重增长明显，肺系数和HYP含量下降明显（P<0.05或P<0.01）。与正常组比较，两模型组小鼠肺泡结构紊乱，肺泡炎明显，肺泡间隔成纤维细胞及基质大量沉积，呈现典型的肺纤维化病变；与模型组相比，NNAV各剂量组小鼠肺泡间隔增宽较模型组明显减轻，肺泡炎明显减轻，肺泡结构有明显改善，肺纤维化程度明显减轻。结论：中华眼镜蛇蛇毒对博莱霉素诱导的肺纤维化和反复给予LPS诱导的肺纤维化具有保护作用，改善机体的病理损伤。第三部分NNAV对博莱霉素致大鼠肺纤维化的保护作用及其机制目的：研究NNAV对博来霉素（Bleomycin，BLM）诱导的肺纤维化大鼠的保护作用及其机制。方法：SD大鼠60只随机分为5组：正常对照组，模型组，NNAV小剂量组（30μg/kg）、中剂量组（90μg/kg）、大剂量组（270μg/kg），每组12只。实验组以灌胃给药的方式预给药四天，分别给予不同剂量NNAV（30，90，270μg/kg）0.2ml/100g。第五天向大鼠气管内缓慢注射博莱霉素（5mg/kg）诱导肺纤维化模型，正常对照组注入等体积的生理盐水。实验期间每天给药一次，记录体重变化，8周后，取材称取肺重，检测肺组织中HYP、MDA、SOD和GSH含量；Western blot检测TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7、Collagen I的表达；HE和Masson染色观察肺损伤及肺纤维化程度；血气分析判断机体是否存在酸碱平衡失调以及缺氧和缺氧程度。结果：BLM可以诱导MDA、HYP、PCO2、乳酸、IL-1β、TNF-α、TGF-β1、p-Smad2/3和Collagen I表达的上调，同时降低SOD、GSH、动脉血中pH值、PO2、SO2和Smad7的表达，而NNAV各剂量组不同程度地减轻BLM诱导的上述改变。HE和Masson染色显示模型组肺泡结构紊乱，肺泡炎明显，肺泡间隔增厚及胶原大量沉积，呈现典型的肺纤维化病变，NNAV可以显著改善病理损伤。结论：NNAV可以改善组织的病理损伤，降低胶原蛋白的沉积，作用机制可能是通过抑制炎症因子和TGF-β1介导的促纤维化基因的转录实现的。