研究背景：人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染是全球性问题，因两者具有相同的传播途径，合并感染现象相当常见，目前全球大约有4千万人感染HIV，其中超过1/3患者感染了HCV，在美国估计有30％的HIV感染者合并感染HCV，在西班牙，13万HIV感染者中至少50％感染者合并HCV感染，在我国经血液感染HIV的患者合并HCV感染率达55.81％-90.36％。HIV、HCV合并感染加速了AIDS和肝损伤的进展，具有协同致病作用。高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的应用已经显著降低了艾滋病患者的死亡率和机会性感染等合并症的发生，但肝脏病变，尤其HCV合并感染导致的肝脏病变，成为了HIV/AIDS患者死亡的主要原因，所以对HIV/HCV合并感染者进行抗丙型肝炎病毒治疗成为近年来颇受关注的问题。无论是HCV单一感染还是HIV/HCV合并感染，IFN-α都是抗HCV的首选药物，但是因为IFN-α在抗HCV的同时可以减少CD4+T淋巴细胞数，对于HIV/HCV合并感染的治疗方案和时机目前尚无确切定论。因此寻求新的具有抗病毒治疗作用的分子一直是HIV、HCV和HIC/HCV合并感染领域的研究热点。本文对HCV、HIV单一感染和HIV/HCV合并感染患者PBMC中APOBEC3G的表达水平进行研究，并动态观察了IFN-α(聚乙二醇干扰素，Pega-IFN-α2a)治疗对慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中APOBEC3G的表达水平的影响，以期为进一步明确APOBEC3G在以上感染中的作用，研究HCV、HIV单一感染及HIV/HCV合并感染时致病的分子机制，为寻求新的抗病毒治疗方法提供依据。　　 目的：基于APOBEC3G在抗病毒尤其抗HIV方面的重要作用，本研究初步探讨HIV、HCV单一感染者及HIV/HCV合并感染者PBMC中APOBEC3G基因的表达，及HCV感染者APOBEC3G表达水平与病毒载量水平和干扰素治疗的关系，对进一步阐明APOBEC3G在以上感染中的作用和HCV、HIV及HIV/HCV合并感染时致病的分子机制，寻求新的抗病毒治疗方法具有较大的指导意义。本研究主要内容：⑴HCV单一感染者(慢性丙型肝炎患者)PBMC中A3G mRNA及其蛋白的表达水平，A3G mRNA水平与HCV病毒载量的关系；HIV单一感染者和HIV/HCV合并感染者PBMC中A3G mRNA表达水平；⑵干扰素治疗的不同时期，慢性丙肝患者PBMC中A3GmRNA的表达及与HCV病毒载量、血浆IFN-α变化的关系。　　 方法：⑴76例慢性丙型肝炎患者为在广州市第八人民医院感染科就诊的病人，诊断符合2004年丙肝防治指南的诊断标准；排除其他病毒感染，包括甲型、乙型、戊型肝炎病毒和巨细胞病毒、EB病毒感染；排除自身免疫性肝炎、酒精性肝病和代谢性肝病；未使用过抗病毒药物及免疫抑制剂；⑵18例HIV感染者为在广州市第八人民医院感染科就诊的AIDS患者，均经过CDC行HIV抗体确证实验阳性并PCR检测病毒载量阳性符合HIV感染诊断标准，排除其他病毒感染，包括甲型、乙型、丙型、戊型肝炎病毒和巨细胞病毒、EB病毒感染；排除自身免疫性肝炎、酒精性肝病和代谢性肝病；未使用抗病毒药物及免疫抑制剂；⑶28例HIV/HCV合并感染者均为在广州市第八人民医院感染科在住院病人，HIV感染经CDC的HIV抗体确证实验阳性符合HIV感染诊断标准，HCV感染符合2004年丙肝防治指南的诊断标病毒感染，排除甲型、乙型、戊型肝炎病毒感染；⑷20例慢性丙型肝炎患者，抗HCV治疗方案为聚乙二醇干扰素(Pega-IFN-α2a，派罗欣)联合利巴韦林治疗一年，收集系列血清及PBMC标本；⑸严格按照入组标准及排除标准，收集标本，各采集外周静脉血15ml，分离血浆4ml(1ml/支)，-80。C冻存；PBMC5-9×107个(2.5-4.5×107个/支)，液氮冻存。⑹目的基因APOBEC3G和内参基因18s rRNA引物及探针根据Yuichi Tanaka，et al，2006等的报道序列，分别选择FAM和HEX进行荧光标记；⑺使用Trizol从PBMC提取RNA，逆转录RNA为cDNA，以cDNA为模板，Real-time RCR检测目的基因及内参基因。⑻Western blotting方法测定PBMC中APOBEC3G蛋白表达量以GAPDH蛋白为内参照，以小鼠抗人GAPDH单克隆抗体和小鼠抗人APOBEC3G多克隆抗体为一抗，HRP标记的抗小鼠IgG为二抗，化学发光法(ECL)对检测结果进行显色，并用Quantity One软件对结果进行分析。⑻运用实时定量PCR的方法测定外周血上清中HCV-RNA的含量。操作按说明书进行，实验结束后结果由软件自动分析得出。⑼ELISA方法测定外周血上清中FN-α的含量，操作按说明书进行，实验结束后酶标仪测定标准品及样本的OD值，根据标准品制定标准曲线，使用Excel软件计算样本IFN-α含量(pg/ml)。⑽用SPSS11.0统计学软件进行统计学处理，两组均数比较用独立样本t检验，多组比较采用完全随机设计方差分析(One way ANOVA)，多重比较采用LSD检验，相关性分析用Pearson积矩相关分析，P＜0.05具有被认为具有统计学意义。　　 结果：①慢性丙肝患者PBMC中A3G mRNA的表达水平显著低于健康对照人群(P＜0.01)；血浆中的病毒载量与PBMC中A3G mRNA的表达水平无明显相关性(R=0.092，P＞0.05)。②以GAPDH蛋白为内参照，Western blotting检测结果提示，与健康人相比较，慢性丙肝患者治疗前PBMC中APOBEC3G蛋白表达水平有下调趋势，但二者间差异无统计学意义(P＞0.05)。③HIV单一感染及HIV/HCV合并感染患者PBMC中A3G mRNA的表达水平HIV单一感染组与健康对照组相比，A3G mRNA表达水平下调，p=0.001＜0.05，差别有统计学意义；HIV/HCV合并感染组与健康对照组比较，A3G mRNA表达水平下调，p=0.030＜0.05，差别有统计学意义。④HIV单一感染组、HIV/HCV合并感染组及HCV单一感染组三组比较，经方差分析，F=3.959，p=0.023＜0.05，三组之间差别有统计学意义，在方差分析情况下进行LSD两两比较检验：HIV单一感染组与HCV单一感染组比较，p=0.766＞0.05，差别无统计学意义；HIV/HCV合并感染组较HIV单一感染组A3G mRNA表达水平增高，p=0.021＜0.05，差别有统计学意义；HIV/HCV合并感染组较HCV单一感染组A3G mRNA表达水平增高，p=0.019＜0.05，差别有统计学意义。⑤20例入组病例，疗程结束后并继续随诊，其中13例达到快速病毒学应答(RVR)，20例均达到早期病毒学应答(EVR)和治疗结束时病毒学应答(ETVR)，其中11例达到持续病毒学应答(SVR)，另外9例患者治疗结束尚未达到24周仍在随诊。⑥20例HCV感染者干扰素抗病毒治疗0周、2周、4周、12周、24周、36周、48周等时间点分别检测A3G mRNA表达水平，结果显示治疗后2周、4周与0周相比，A3G mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后12周、24周、36周、48周和0周相比，A3G mRNA表达水平均呈现上调趋势，P值均＜0.001，差异有统计学意义。在接受干扰素治疗过程中，血浆病毒载量随治疗快速下降，至12W基本转阴；血浆中IFN-α含量逐渐上升并维持在较高水平。　　 结论：⑴HCV感染(慢性丙型肝炎)患者PBMC中APOBEC3G的表达水平明显降低，但APOBEC3G的表达水平与HCV的复制水平无相关性。⑵HIV、HCV感染者PBMC中APOBEC3G的表达均降低，HCV感染导致APOBEC3G表达的下调可能加速HIV/HCV合并感染者中HIV/AIDS的疾病进展，这可能是HIV/HCV协同致病的机制之一。⑶干扰素可上调慢性丙型肝炎患者PBMC中APOBEC3G表达，因此，在HIV/HCV合并感染时外源性干扰素在抗HCV的同时可能具有抗HIV作用。