双酚A对成年雄性大鼠生殖系统的影响

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目的:双酚A是一种环境内分泌干扰物,广泛存在于食品饮料包装、粘合剂、建筑材料、电子元件和纸张涂料中。既往研究表明双酚A可能对生殖系统、免疫系统、代谢系统、脑发育及心理行为存在威胁,也有研究表明,双酚A对男性生殖健康存在不利影响,但在每日容许摄入量水平下是否存在损害作用尚不清楚。本实验研究拟观察长期食物添加每日容许摄入量的双酚A,对成年雄性Wistar大鼠生殖系统的影响,并探讨双酚A对生殖功能的作用机制,为双酚A对男性生殖健康的研究提供科学依据。方法:40只成年Wistar雄性大鼠,体重(195±10g)。随机分为4组,依据在饲料中添加双酚A的剂量,分别命名为:溶剂对照组(C)(双酚A剂量为0μg/kg.bw),高剂量组(B250)(双酚A剂量为250μg/kg.bw),中剂量组(B50)(双酚A剂量为50μg/kg.bw),低剂量组(B10)(双酚A剂量为10μg/kg.bw)。将不同剂量的双酚A溶于相同体积的玉米油中,配置出不同浓度的混合液。每组取相同0.3ml体积的混合液,与5g普通大鼠饲料相混合,搅拌均匀,即得到含有不同剂量双酚A的饲料。对照组,则使用0.3ml玉米油与饲料直接混合,搅拌均匀。饲养动物期间,每天早上8点给予大鼠5g含有玉米油和双酚A(对照组只有玉米油)的饲料,下午5点再给予大鼠适量普通饲料,任其自由食用记录大鼠的进食量。在喂养期间,记录大鼠体重,观察大鼠生存、活动状态。喂养35周后,处死大鼠。于冰盘上迅速分离大鼠肝脏、肾脏、心脏、睾丸、附睾组织,除去脂肪组织和筋膜,用滤纸吸取多余组织液和血液,置于电子天平称重,记录重量。分离大鼠两侧附睾,取一侧附睾迅速称重后,置于10ml生理盐水中,用眼科剪剪碎睾组织,在37℃下孵育15min。用一次性吸管吸取适量上述附睾液,均匀涂布在载玻片上。制成精子畸形涂片后,在显微镜下计数精子畸形数目,计算精子畸形率。称重后将大鼠右侧睾丸组织分成5份,分别装入EP管,于-80℃冰箱冻存。用实时定量PCR方法检测大鼠睾丸组织中自杀相关因子(Fas/FasL)mRNA含量、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)mRNA含量、G蛋白偶联受体(GPER)mRNA含量。结果:1.双酚A组大鼠,体重、肝脏系数、肾脏系数、心脏系数与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.与对照组相比,高剂量组(双酚A染毒量为250μg/kg.bw)大鼠精子畸形率升高,且P<0.05,差异有统计学意义。3.双酚A组大鼠睾丸组织中Fas mRNA的含量与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量组大鼠睾丸组织中Fasl mRNA的含量高于对照组,经统计,差异有统计学意义(P <0.05)。高剂量组大鼠睾丸组织中Caspase3mRNA的含量高于对照组,并且具有统计学差异(P <0.05)。各双酚A组大鼠睾丸组织中GPER mRNA的含量与对照组相比,经统计分析,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在本实验条件下,250μg/kg.bw双酚长期暴露对成年雄性大鼠生殖功能具有一定的影响,但未观察到每日容许摄入量水平双酚A的损害作用。
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