纯钛表面微弧氧化处理对人牙龈上皮细胞及变形链球菌早期行为的影响

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牙种植体早期的研究多重在种植体-骨结合界面,很少有研究将重点放在种植体-软组织结合界面上。尽管牙种植体当今有着较高成功率,但仍然有种植体失败的报道。临床数据表明,由于穿龈部位的愈合不良等问题,17%的修复重建病人会而出现感染。牙种植体-软组织结合的穿龈部位的愈合不良是导致种植体周围炎的重要因素,因此,牙种植体材料表面结构的处理很重要。有文献报道,不同的牙种植体表面对于牙龈软组织和细菌的反应情况也有所不同。钛表面微弧氧化处理骨结合良好,但是穿龈部位的反应情况却很少报道。本课题旨在对微弧氧化纯钛种植体表面穿龈部位进行实验研究,着重于观察微弧氧化纯钛种植体表面结构对于人牙龈上皮上皮细胞和常见致病菌变形链球菌的生物学行为的影响,希望能为微弧氧化处理的纯钛种植体临床应用提供更多的研究依据。实验方法和结果首先,采用商业纯钛制备出具有特征性微孔样结构的纯钛种植体实验试件,并通过对正畸导萌术中切取的正常人牙龈上皮细胞进行了原代培养,获得了较高纯度的足量人牙龈上皮细胞(hGEC)。在此基础上,将试件分为微弧氧化组(MAO)和纯钛抛光组(P),进一步观察人牙龈上皮细胞在微弧氧化处理的纯钛材料表面的黏附、增殖、表皮生长因子表达及相关基因表达水平的差别,来评价微弧氧化表面处理技术对于纯钛种植体和牙龈软组织界面的影响,并进一步对变形链球菌在材料表面的黏附与增殖情况作了初步研究。结果发现:1、扫描电镜下通过对细胞形态的观察表明人牙龈上皮细胞在两组试样表面的细胞黏附情况都比较好,两组间在相同视野内的黏附细胞数量上也未见明显差别。2、MTT法检测的人牙龈上皮细胞在不同处理的纯钛表面黏附情况表明,微弧氧化处理纯钛表面(MAO)在接种细胞0.5小时、1小时、2小时等时间点其表面人牙龈上皮细胞数量略高于抛光处理纯钛表面(P),但均没有统计学差异(P>0.05)。3、MTT法检测人牙龈上皮细胞在不同处理纯钛表面的增殖情况表明,微弧氧化处理纯钛表面(MAO组)在接种细胞后的第1天和第2天,其细胞增殖迅速,且细胞数量明显高于(P <0.05)抛光处理纯钛表面(P组),但第5天开始,两组试件表面细胞增殖速度都有所放缓,且两组表面细胞数量之间没有显著差异(P>0.05)。4、通过酶联免疫吸附分析法检测微弧氧化处理纯钛和抛光纯钛对人牙龈上皮细胞分泌表皮生长因子影响情况的检查结果,所得数据显示两组试件表面接种人牙龈上皮细胞并培养7天后,所得产物中表皮生长因子的表达量之间没有明显统计学差异(P>0.05)。5、凝胶电泳图和半定量分析结果可见,两组试件人牙龈上皮细胞培养后第一天均有Itgβ1、E-cad和PCNA的表达;Itgβ1和PCNA在第1、3、5天的同一时间点内不同表面处理组间的表达水平没有明显差别(p>0.05);E-cad在第1天微弧氧化处理表面表达水平高于抛光组(p <0.05),但第3、5天的表达水平在两种处理表面无显著差异(p>0.05);EGF在第1天两组试件表面的表达水平极低,随着培养时间的延长,在第3天和第5天其表达水平明显升高,但在不同表面处理的两组间没有显著差异(p>0.05)。6、对接种于不同处理纯钛表面变形链球菌的观察显示:i.在抛光处理的纯钛表面变形链球菌的黏附增殖的数量较少,多沿抛光表面纹理痕迹成小团簇状散在分布,随着培养时间的延长,试件表面变形链球菌的数量也逐渐增多。ii.在微弧氧化处理的纯钛表面,变形链球菌多以微弧氧化处理形成的表面空隙为中心向周围铺散分布中,其黏附与增殖的数量较多,且随着培养时间的延长,表面细菌的数量也逐渐增多。iii.抛光处理纯钛组,其表面变形链球菌数量在培养4小时组和培养24小时组之间存在显著差异(p <0.05),但在培养4小时组和培养8小时组之间、培养8小时组和培养24小时组之间的变形链球菌数量均没有明显差别(p>0.05)。iv.微弧氧化处理组,其表面变形链球菌的数量在培养4小时组和培养8小时组之间,培养4小时组和培养24小时组之间差异明显,有统计学意义(p <0.05),培养8小时组和培养24小时组之间无明显差异(p>0.05)。v.组间比较数据结果显示,4h,8h,24h三个时间点微弧氧化处理纯钛表面的细菌计数结果均明显高于抛光处理组(p <0.05)。结论:1、MTT法检测在最初2小时内,两种处理表面细胞黏附数目相当,说明在最早期黏附阶段,微弧氧化处理未显现出对于人牙龈上皮细胞的黏附促进作用。2、MTT法检测的1天、3天、5天、7天细胞增殖情况及E-cad、EGF基因在细胞培养第1天和第3天的表达水平差异表明,微弧氧化处理对人牙龈上皮细胞较早期的黏附与增殖有一定的积极影响。3、微弧氧化处理的表面由于具有较高的粗糙度和表面能,更有利于变形链球菌的初期黏附。4、综合上述结果,我们认为微弧氧化处理对于人牙龈上皮细胞黏附与增殖的促进作用不强,但具有很强的细菌吸附能力,故而不适于作为种植体穿龈部和基台部的表面处理技术。
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