近年来,利用真菌诱导子刺激植物组织提高次生代谢物产量的研究成为热点,作为一种特定的化学信号,真菌诱导子能快速、专一和选择性地诱导植物多种特定基因的表达,尤其是活化特定的次生代谢途径,积累次生代谢产物。内生真菌普遍存在于健康植物组织中,与植物在长期“协同进化”过程中形成了一种稳定的互惠共生关系。愈来愈多的研究证明内生真菌除了自身产生活性物质外,还可作为生物诱导子来调节植物次生代谢物的产生,但内生真菌促进植物次生代谢物合成积累的机制报道较少。本研究在实验室多年筛选苦豆子活性内生真菌菌株和诱导苦豆子愈伤组织和组培苗的基础上,建立苦豆子悬浮细胞培养体系,筛选出有效提高苦豆子喹诺里西啶生物碱含量的内生真菌诱导子并优化诱导条件,在此基础上,初步探讨苦豆子内生真菌对宿主细胞中喹诺里西啶生物碱合成积累的影响。通过测定内生真菌诱导苦豆子的生理防御反应,揭示苦豆子内生真菌诱导宿主喹诺里西啶生物碱合成积累的作用机制。结果如下：1、以苦豆子子叶和胚轴为材料,对苦豆子愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,探索并建立苦豆子悬浮细胞体系。结果表明：子叶和胚轴为愈伤组织生成的最佳外植体,愈伤组织最佳诱导培养基是MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;最佳继代增殖培养基是MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L。以胚轴诱导的愈伤组织是细胞悬浮培养的理想材料,初始接种量在10-20%,添加3%的蔗糖,有利于悬浮细胞体系的生成。2、以苦豆子愈伤组织为试材,采用HPLC法建立氧化槐果碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱和苦参碱5种单碱的分离测定的色谱方法。结果表明：色谱柱：Ultimate(?)AQ-C18 (4.6 μmx250 mm×5 mm);流动相：0.01 mol/L磷酸缓冲液-甲醇(50：50 V/V)；检测波长216 nm；柱温35℃；流速1.0 mL/min。检测愈伤组织中5种单碱含量,其中氧化槐果碱和槐定碱在愈伤组织继代培养第4代含量相对较高,分别为1.2056和0.1165 mg/g,随着继代培养次数的增加,氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱含量略有波动,大致呈下降趋势。3、从苦豆子中分离并鉴定了8株内生真菌,分别制备灭活菌丝和菌液浓缩物,研究内生真菌诱导子不同种类、浓度和诱导时间对苦豆子无菌苗和愈伤组织的生长以及喹诺里西啶生物碱含量的影响。结果表明：8株苦豆子内生真菌诱导子中,菌液浓缩物的诱导效果要强于灭活菌丝。菌株HMGKDF1菌液浓缩物和灭活菌丝能明显促进愈伤组织的生长,净生长率是对照的1.82和1.42倍；菌NDZKDF13菌液浓缩物对苦豆子愈伤组织生物碱的合成效果明显,生物碱含量为0.5483 mg/g,是对照的23.8倍；内生真菌诱导子含糖量在0.01-1.00mg/L时能够促进无菌苗中喹诺里西啶生物碱合成积累。4、以4株高活性苦豆子内生真菌菌液浓缩物为诱导子,研究其对苦豆子无菌苗生理防御反应和喹诺里西啶生物碱积累的影响。结果表明：4株苦豆子内生真菌诱导子均可促进喹诺里西啶生物碱的合成积累,其中内生真菌XKYKDF40的诱导效果最好,无菌苗蛋白含量净增长量最大,是对照的1.42倍；生物总碱含量为4.2101 mg/g,是对照的3.63倍。诱导SOD、CAT和 POD等细胞抗氧化酶和生物碱合成的关键性酶PAL活性升高。