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第一部分 Tfh细胞和B细胞在人慢性移植物抗宿主病中的作用研究目的:探究循环滤泡辅助性T(cTfh)细胞、滤泡外辅助性T细胞和B细胞在人慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的作用及机制。方法:本研究收集了2016-2019年间在我院血液科行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的受者发生cGVHD时的外周血,采用Ficoll密度梯度离心法分选单个核细胞(MNCs),应用流式细胞术检测cTfh细胞、滤泡外辅助性T细胞和B细胞及其各亚群的表达,同时收集健康供体外周血作对照。采用SPSS 20.0中的独立样本T检验和Mann-Whitney U检验比较各群细胞在两组中的表达差异,相关性分析采用Spearman相关分析。结果:本研究共纳入64例cGVHD(活动期)患者,其中男性37例,女性27例,中位年龄37.5(10-64)岁。中位标本收集距移植时间为11.87(3.50-33.67)个月。cGVHD累及1个器官41(64.1%)例,2个器官16(25%)例,3个或以上器官7(10.9%)例。所有患者检测了 cTfh细胞和滤泡外辅助性T细胞,对其中的20例患者进行了 B细胞亚群的检测。研究结果显示:1.cTfh(CD4+CXCR5+)细胞、ICOS+cTfh细胞和Ki-67+cTfh细胞在cGVHD患者中表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);PD1+cTfh细胞在cGVHD患者中表达呈降低趋势,两组差异无统计学意义(P>0.05);而cGVHD患者中IL-21+cTfh细胞表达较对照组升高,差异无统计学意义(P>0.05);相关性分析发现cGVHD患者中Ki-67+cTfh细胞的表达与PD1+cTfh细胞呈正相关(r=0.4896,P<0.05)。2.在cGVHD患者和健康供体中均检测到表型为CD44+CD62L-PSGL-1-CD4+的滤泡外辅助性T细胞。与健康供体相比,它在cGVHD患者中表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.cGVHD患者外周血存在B细胞亚群改变,CD27表达阴性的两种B细胞在cGVHD患者中表达降低,其中以初始B细胞(CD19+IgD+CD38loCD27-)降低显著,差异有统计学意义(P<0.05),过渡型B细胞(CD19+IgD+CD38hi CD27-)呈降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而cGVHD患者中两种CD27表达阳性B细胞较对照组明显升高,两种细胞为pre-GC B细胞(CD19+IgD+CD38hi CD27+)和浆母细胞/浆细胞(PB/PC,CD19+IgDlo/-CD38hi CD27+),差异有统计学意义(P<0.05)。4.滤泡外辅助性T细胞和Ki-67+cTfh细胞与PB/PC的表达呈正相关(分别为r=0.5412,P<0.05;r=0.6486,P<0.05)。结论:cGVHD患者cTfh细胞表达下降,滤泡外辅助性T细胞表达上调,与B细胞相互作用,参与cGVHD的发生发展进程。第二部分 淋巴细胞亚群在移植后慢性移植物抗宿主病中的表达研究目的:探究淋巴细胞亚群在移植后cGVHD患者外周血中的表达水平,分析其与cGVHD的相关性。方法:收集2019年3月至2019年8月期间在我院血液科流式细胞实验室行移植后免疫功能检查的allo-HSCT受者的临床和实验室资料,将病例分为cGVHD组和无cGVHD组,比较两组淋巴细胞亚群的分布差异,组间比较采用SPSS20.0中的独立样本T检验和 Mann-WhitneyU检验。结果:该研究共纳入53例allo-HSCT后患者,移植时间段为2013年1月至2018年11月,移植后免疫功能检测时间段为2019年3月至2019年8月。中位移植后免疫功能检查的时间为20.7(6.3-77)个月。中位年龄为29(16-50)岁。53例患者中cGVHD患者26例,其中cGVHD累及1个器官15(57.7%)例,2个器官3(11.5%)例,3个及以上器官8(30.8%)例;其中移植后6-12个月4(15.4%)例,1-2年13(50%)例,9(34.6%)例移植后2年以上。无cGVHD患者27例,其中移植后6-12个月3(11.2%)例,1-2年12(44.4%)例,12(44.4%)例移植后2年以上。研究结果显示:1.cGVHD组的CD4+T淋巴细胞百分比和细胞计数较无cGVHD组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);CD8+T淋巴细胞的百分比和细胞计数在二组间无统计学差异(P>0.05);调节性T细胞(CD3+CD4+CD25+CD127±)的百分比在cGVHD组中呈降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05),其细胞计数在cGVHD组中明显降低,两组差异有统计学意义(P<0.05)。2.cGVHD组的B淋巴细胞百分比和细胞计数较无cGVHD组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);初始B淋巴细胞(CD19+CD27-IgD+)的百分比在cGVHD组中呈降低趋势,两组差异无统计学意义(P>0.05),其细胞计数在cGVHD组中降低,差异有统计学意义(P<0.05);幼稚未成熟B淋巴细胞(CD19+CD27-CD38high CD24+)的百分比在cGVHD组中呈降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05),其细胞计数在cGVHD组降低,差异有统计学意义(P<0.05);cGVHD组的MZ B淋巴细胞(CD19+CD27+IgD+)的百分比较无cGVHD组呈升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05);经典转变型B淋巴细胞(CD19+CD27+CD38dim IgD-)的百分比在cGVHD组呈升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05);浆母细胞(CD19+CD27high CD3 8highIgD-)的百分比和细胞计数在cGVHD组呈升高趋势,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究随访allo-HSCT后有cGVHD和无cGVHD患者的淋巴细胞亚群比例。与无cGVHD患者相比,cGVHD患者调节性T细胞、初始B淋巴细胞和幼稚未成熟B淋巴细胞比例和细胞计数降低,MZ B淋巴细胞和经典转变型B淋巴细胞比例有上升趋势,临床上可动态监测移植后淋巴细胞亚群的变化,判断患者免疫功能状态。