经皮冠状动脉介入治疗相关造影剂肾病尿液代谢组学研究

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研究目的:运用液相色谱-质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)技术分别对经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous Coronary Intervention,PCI)术后发生造影剂肾病(Contrast-Induced Nephropathy,CIN)患者及肾功能正常患者尿液进行检测,同时运用多元统计方法对所得的数据进行统计学处理,考察存在于CIN患者和对照组人群之间的代谢差异,寻找与CIN诊断相关的生物标记物,同时考察这些标记物对PCI术后发生CIN的预测能力,为CIN的诊断及探讨其发病发展机制提供科学依据。研究方法:1、本研究收集PCI术后20位患者(CIN及对照组各10位)尿液,对尿液样本采用高速离心处理,微孔滤膜过滤,取上清供LC-MS检测分析,获得它们的代谢图谱和相关数据。2、采用Analysis Base File Converter和MS-DIAL软件将采集的原始高分辨液质联用数据进行峰对齐、峰识别、峰提取等预处理,将归一化后的数据矩阵导运用SIMCA-P(Version 13.0,Umetrics,Sweden)软件对归一化后的数据采用有监督模式的正交偏最小二乘法-判别分析(Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis,OPLS-DA)和T检验筛选显著变化的代谢产物并且根据峰强度计算p值。根据相关变量投影重要性指标值(variable important in the projection,VIP)>2和p<0.05标准筛选差异代谢物。3、通过与HMDB(www.hmdb.ca)等数据库进行比对,寻找与之匹配的可能代谢物。然后通过查询相关文献进一步确认代谢物信息,确定最相关的差异代谢物。根据上述得到的差异代谢物名称于采用Bioincloud网站(https://www.bioincloud.tech)和Metabo Analy网站(https://www.metaboanalyst.ca/)进行差异代谢物的统计分析和通路富集分析,然后查询相关文献验证结果。研究结果:1、CIN组及对照组尿液标本经LC-MS技术处理后,SIMCA实现了对PCA、OPLS-DA等模型得分图的直观可视化,再经过统计学方法验证后得出CIN患者和对照组患者尿液之间存在差异代谢物。2、利用HMDB数据库寻找差异代谢物,共筛选出N-棕榈酰精氨酸、α-酮戊二酸、FAPy-腺嘌呤、L-谷氨酰胺等16种差异代谢物可能作为潜在生物标志物,帮助诊断CIN。3、应用Metabo Analyst5.0网站中的Pathway Analysis对上图所示筛选出的16种差异代谢物代谢通路分析。最后共匹配到11条代谢通路。根据影响因子值及查阅相关文献,我们认为精氨酸的生物合成通路和丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的代谢通路与CIN最相关。研究结论:1、本研究应用LC-MS技术对CIN患者和冠心病患者行PCI治疗未达到造影剂肾病患者(即对照组)尿液样本进行分析,共筛选出16种差异代谢物,可能作为潜在生物标志物,帮助诊断CIN。2、机体内共有11条代谢通路参与CIN的发生及发展,根据实验结果得出精氨酸的生物合成通路和丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的代谢通路可能在CIN发生发展中发挥最重要作用。3、精氨酸的生物合成和丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的代谢这两条通路在CIN的发生和发展过程中,可能发挥了重要作用。但尚不能明确的是这两条代谢通路分别发挥了作用,或是这两条代谢通路相互联合作用下产生了影响,需要进一步探索和研究。
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